O isolamento de DNA é uma técnica usada para extrair DNA de amostras biológicas, que pode então ser utilizado para análise genética e clonagem. É uma etapa fundamental em muitos experimentos biológicos, como PCR e clonagem.
Como isolar DNA
O procedimento baseia-se em uma série de etapas químicas e físicas para romper as membranas da célula, mantendo as frágeis fitas de DNA intactas.
- Lise
O primeiro passo é romper as células. Isso é feito usando um tampão de lise, que tipicamente contém detergentes (como SDS) para dissolver as membranas celulares gordurosas e enzimas (como Proteinase K) para digerir as proteínas que mantêm o DNA firmemente enrolado. Em alguns casos, força mecânica — como moer uma amostra em nitrogênio líquido — é usada para quebrar paredes celulares resistentes.
- Remoção de Proteínas e Purificação
Uma vez que as células são rompidas, resta um “lisado” — uma sopa desordenada de DNA, RNA, proteínas e lipídios. Para separar o DNA, os cientistas frequentemente adicionam sais concentrados ou solventes orgânicos (como fenol-clorofórmio). Isso faz com que as proteínas se aglomerem e sedimentem, enquanto o DNA permanece dissolvido na camada líquida. A amostra é centrifugada, o que força os detritos pesados para o fundo, deixando o líquido rico em DNA no topo.
- Precipitação
O DNA é solúvel em água, mas insolúvel em álcool. Adicionando etanol gelado ou isopropanol, as moléculas de DNA são forçadas a se aglomerar e se tornar visíveis a olho nu. Frequentemente parece com fios finos e esbranquiçados ou um pequeno pellet branco no fundo do tubo.
- Lavagem e Ressuspensão
O pellet de DNA é lavado com etanol 70% para remover quaisquer sais ou contaminantes restantes. Finalmente, o álcool é evaporado e o DNA purificado é redissolvido (ressuspendido) em tampão TE (Tris-EDTA) ou água livre de nucleases. Este “ouro puro” pode agora ser armazenado em um freezer por anos ou usado imediatamente para experimentos.
