A eletroforese em gel de agarose é uma técnica laboratorial fundamental usada para separar fragmentos de DNA com base em seu tamanho. Quando os cientistas precisam analisar o DNA após digestão por restrição, PCR ou purificação, eles recorrem à eletroforese em gel para visualizar os resultados.
Como Funciona a Eletroforese em Gel de Agarose
A técnica baseia-se no fato de que o DNA tem carga negativa e migrará em direção a um eletrodo positivo quando colocado em um campo elétrico.
- Preparação do Gel
O pó de agarose é misturado com tampão TAE ou TBE (tipicamente 1× TAE ou 0,5× TBE) e aquecido até dissolver. A agarose fundida é vertida em uma bandeja de moldagem com um pente inserido para criar poços. À medida que esfria, solidifica-se em uma matriz de gel porosa.
- Carregamento das Amostras
As amostras de DNA são misturadas com um corante de carregamento contendo glicerol (para fazê-las afundar) e corantes de rastreamento (para monitorar a migração). As amostras são pipetadas nos poços do gel. Uma escada de DNA — uma mistura de fragmentos com tamanhos conhecidos — é carregada no primeiro poço como referência de tamanho.
- Eletroforese
Uma corrente elétrica é aplicada através do gel. Como o DNA tem carga negativa, os fragmentos movem-se através do gel em direção ao eletrodo positivo. Fragmentos menores navegam pelos poros do gel facilmente e viajam rapidamente, enquanto fragmentos maiores movem-se mais lentamente. Com o tempo, os fragmentos separam-se em bandas distintas com base em seu tamanho.
- Visualização
Após a eletroforese, o gel é corado com um corante de ligação ao DNA, como brometo de etídio ou SYBR Safe. Quando colocado sob luz UV, o corante fluoresce, revelando as bandas de DNA. Comparando as posições das bandas com a escada de DNA, os cientistas podem determinar o tamanho de cada fragmento.
