O ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA) é um imunoensaio baseado em placas usado para detectar e quantificar proteínas específicas, anticorpos, hormônios e outras moléculas. Ele combina a especificidade dos anticorpos com a sensibilidade da detecção baseada em enzimas.
Como Funciona o ELISA
- Revestimento
Uma placa de microtitulação é revestida com um antígeno ou anticorpo de captura. A molécula alvo liga-se à superfície através de adsorção passiva. A placa é incubada durante a noite e depois lavada para remover o material não ligado.
- Bloqueio
Uma solução de bloqueio contendo uma proteína irrelevante como BSA ou caseína é adicionada aos poços. Isso cobre quaisquer sítios de ligação restantes na superfície da placa, evitando a ligação inespecífica nas etapas subsequentes.
- Anticorpo de Detecção
Um anticorpo de detecção conjugado a uma enzima — mais comumente peroxidase de rábano (HRP) ou fosfatase alcalina (AP) — é adicionado. Em um ELISA sanduíche, um anticorpo primário liga-se ao alvo, e um anticorpo secundário ligado à enzima liga-se ao primário.
- Geração de Sinal
Um substrato para a enzima é adicionado. A enzima converte o substrato em um produto colorido, fluorescente ou luminescente. A reação é deixada prosseguir por um tempo determinado e depois interrompida.
- Medição
O sinal é medido usando um leitor de placas. A intensidade do sinal é proporcional à quantidade de molécula alvo na amostra. Uma curva padrão usando concentrações conhecidas permite a quantificação.
- Formatos de ELISA
- ELISA Direto: O antígeno é revestido, e um anticorpo ligado à enzima o detecta diretamente.
- ELISA Indireto: O antígeno é revestido, um anticorpo primário se liga, e um anticorpo secundário ligado à enzima o detecta.
- ELISA Sanduíche: Um anticorpo de captura é revestido, o antígeno se liga, e um anticorpo de detecção completa o sanduíche.
- ELISA Competitivo: O sinal diminui à medida que a concentração do alvo aumenta.
