Le dosage d’immunoabsorption par enzyme liée (ELISA) est un immunodosage sur plaque utilisé pour détecter et quantifier des protéines, anticorps, hormones et autres molécules spécifiques. Il combine la spécificité des anticorps avec la sensibilité de la détection enzymatique.
Comment Fonctionne l’ELISA
- Revêtement
Une plaque de microtitration est recouverte d’un antigène ou d’un anticorps de capture. La molécule cible se lie à la surface par adsorption passive. La plaque est incubée toute une nuit puis lavée pour éliminer le matériel non lié.
- Blocage
Une solution de blocage contenant une protéine non pertinente telle que la BSA ou la caséine est ajoutée aux puits. Cela couvre tous les sites de liaison restants sur la surface de la plaque, empêchant les liaisons non spécifiques dans les étapes suivantes.
- Anticorps de Détection
Un anticorps de détection conjugué à une enzyme — le plus souvent la peroxydase de raifort (HRP) ou la phosphatase alcaline (AP) — est ajouté. Dans un ELISA sandwich, un anticorps primaire se lie à la cible, et un anticorps secondaire lié à l’enzyme se lie à l’anticorps primaire.
- Génération du Signal
Un substrat pour l’enzyme est ajouté. L’enzyme convertit le substrat en un produit coloré, fluorescent ou luminescent. La réaction est laissée se dérouler pendant un temps déterminé puis arrêtée.
- Mesure
Le signal est mesuré à l’aide d’un lecteur de plaque. L’intensité du signal est proportionnelle à la quantité de molécule cible dans l’échantillon. Une courbe standard utilisant des concentrations connues permet la quantification.
- Formats ELISA
- ELISA direct : L’antigène est fixé, et un anticorps lié à une enzyme le détecte directement.
- ELISA indirect : L’antigène est fixé, un anticorps primaire se lie, et un anticorps secondaire lié à une enzyme le détecte.
- ELISA sandwich : Un anticorps de capture est fixé, l’antigène se lie, et un anticorps de détection complète le sandwich.
- ELISA compétitif : Le signal diminue à mesure que la concentration de la cible augmente.
