A quantificação de proteínas é o processo de determinar a concentração de proteína em uma solução. A quantificação precisa de proteínas é essencial para muitas aplicações posteriores, incluindo SDS-PAGE, Western blot, ensaios enzimáticos e estudos estruturais.

Métodos Comuns de Quantificação de Proteínas

Ensaio de Bradford

O ensaio de Bradford baseia-se na ligação do corante Coomassie Brilliant Blue G-250 às proteínas. O corante muda de marrom para azul quando ligado à proteína, com o máximo de absorbância mudando de 465 nm para 595 nm. O ensaio é rápido, simples e compatível com a maioria dos tampões. É menos preciso na presença de detergentes.

Ensaio BCA

O ensaio do ácido bicinconínico (BCA) baseia-se na redução de Cu2+ para Cu1+ por proteínas em meio alcalino. O BCA então quelata o Cu1+, formando uma cor púrpura que absorve a 562 nm. O ensaio BCA é mais tolerante a detergentes do que o ensaio de Bradford, mas é menos compatível com agentes redutores.

Ensaio de Lowry

O ensaio de Lowry combina a reação do biureto (quelação de cobre) com o reagente de Folin-Ciocalteu, que reage com resíduos de tirosina e triptofano. Produz uma cor azul medida a 750 nm. É sensível, mas requer tempo cuidadoso e é afetado por muitas substâncias interferentes.

Absorbância UV (A280)

As proteínas absorvem luz UV a 280 nm devido aos resíduos de triptofano e tirosina. A absorbância a 280 nm fornece uma estimativa rápida e não destrutiva da concentração de proteína. É mais precisa para proteínas puras com coeficientes de extinção conhecidos.

Curva Padrão

Todos os ensaios colorimétricos requerem uma curva padrão. Diluições seriadas de um padrão proteico conhecido, tipicamente albumina de soro bovino (BSA), são preparadas e medidas. A absorbância da amostra desconhecida é comparada à curva padrão para calcular sua concentração.