La quantification des protéines est le processus de détermination de la concentration de protéines dans une solution. Une quantification précise des protéines est essentielle pour de nombreuses applications en aval, notamment le SDS-PAGE, le Western blot, les dosages enzymatiques et les études structurales.

Méthodes Courantes de Quantification des Protéines

Dosage de Bradford

Le dosage de Bradford est basé sur la liaison du colorant bleu de Coomassie Brillant G-250 aux protéines. Le colorant passe du brun au bleu lorsqu’il est lié à une protéine, le maximum d’absorbance passant de 465 nm à 595 nm. Le dosage est rapide, simple et compatible avec la plupart des tampons. Il est moins précis en présence de détergents.

Dosage BCA

Le dosage à l’acide bicinchoninique (BCA) repose sur la réduction du Cu2+ en Cu1+ par les protéines dans un milieu alcalin. Le BCA chélate ensuite le Cu1+, formant une couleur violette qui absorbe à 562 nm. Le dosage BCA tolère mieux les détergents que le dosage de Bradford mais est moins compatible avec les agents réducteurs.

Dosage de Lowry

Le dosage de Lowry combine la réaction du biuret (chélatation du cuivre) avec le réactif de Folin-Ciocalteu, qui réagit avec les résidus tyrosine et tryptophane. Il produit une couleur bleue mesurée à 750 nm. Il est sensible mais nécessite un timing minutieux et est affecté par de nombreuses substances interférentes.

Absorbance UV (A280)

Les protéines absorbent la lumière UV à 280 nm en raison des résidus tryptophane et tyrosine. L’absorbance à 280 nm fournit une estimation rapide et non destructive de la concentration en protéines. Elle est plus précise pour les protéines pures avec des coefficients d’extinction connus.

Courbe Standard

Tous les dosages colorimétriques nécessitent une courbe standard. Des dilutions en série d’un standard protéique connu, généralement la sérumalbumine bovine (BSA), sont préparées et mesurées. L’absorbance de l’échantillon inconnu est comparée à la courbe standard pour calculer sa concentration.