Der Enzymimmunoassay (ELISA) ist ein plattenbasierter Immunoassay zum Nachweis und zur Quantifizierung spezifischer Proteine, Antikörper, Hormone und anderer Moleküle. Es kombiniert die Spezifität von Antikörpern mit der Empfindlichkeit des enzymbasierten Nachweises.
Wie ELISA funktioniert
- Beschichtung
Eine Mikrotiterplatte ist mit einem Antigen oder Fängerantikörper beschichtet. Das Zielmolekül bindet durch passive Adsorption an die Oberfläche. Die Platte wird über Nacht inkubiert und dann gewaschen, um ungebundenes Material zu entfernen.
- Blockieren
In die Vertiefungen wird eine Blockierungslösung gegeben, die ein irrelevantes Protein wie BSA oder Kasein enthält. Dadurch werden alle verbleibenden Bindungsstellen auf der Plattenoberfläche abgedeckt und eine unspezifische Bindung in nachfolgenden Schritten verhindert.
- Nachweisantikörper
Ein an ein Enzym konjugiertes Erkennungsantikörper – am häufigsten Meerrettichperoxidase (HRP) oder alkalische Phosphatase (AP) – wird hinzugefügt. Bei einem Sandwich-ELISA bindet ein Primärantikörper das Ziel und ein enzymgebundener Sekundärantikörper den Primärantikörper.
- Signalerzeugung
Ein Substrat für das Enzym wird hinzugefügt. Das Enzym wandelt das Substrat in ein farbiges, fluoreszierendes oder leuchtendes Produkt um. Man lässt die Reaktion eine bestimmte Zeit lang ablaufen und stoppt sie dann.
- Messung
Das Signal wird mit einem Plattenlesegerät gemessen. Die Intensität des Signals ist proportional zur Menge des Zielmoleküls in der Probe. Eine Standardkurve mit bekannten Konzentrationen ermöglicht die Quantifizierung.
- ELISA-Formate
- Direkter ELISA: Antigen wird beschichtet und ein enzymgebundener Antikörper weist es direkt nach.
- Indirekter ELISA: Antigen wird beschichtet, ein primärer Antikörper bindet und ein enzymgebundener sekundärer Antikörper erkennt es.
- Sandwich-ELISA: Ein Fängerantikörper wird beschichtet, das Antigen bindet und ein Detektionsantikörper vervollständigt das Sandwich.
- Kompetitiver ELISA: Das Signal nimmt mit zunehmender Zielkonzentration ab.
