Kromatografi Lapis Tipis (TLC) adalah teknik kromatografi sederhana, murah, dan cepat yang digunakan untuk memisahkan campuran, memantau kemajuan reaksi, dan menilai kemurnian senyawa. Ini adalah salah satu teknik yang paling umum digunakan di laboratorium kimia organik.
Prinsip TLC
Fase diam (biasanya silika gel atau alumina) dilapisi sebagai lapisan tipis pada pelat kaca, aluminium, atau plastik. Sampel diterapkan sebagai bintik kecil di dekat bagian bawah pelat, yang kemudian ditempatkan dalam ruang pengembang yang mengandung fase gerak (sistem pelarut) yang naik melalui aksi kapiler. Senyawa bermigrasi pada laju yang berbeda berdasarkan afinitas diferensialnya terhadap fase diam dan fase gerak.
Faktor Retensi (Rf)
Faktor retensi (Rf) didefinisikan sebagai jarak yang ditempuh senyawa dibagi dengan jarak yang ditempuh oleh fase gerak. Nilai Rf berkisar dari 0 (tanpa migrasi) hingga 1 (bergerak dengan fase gerak). Dalam kondisi yang identik, nilai Rf bersifat karakteristik untuk setiap senyawa dan dapat digunakan untuk identifikasi tentatif. Faktor-faktor yang mempengaruhi Rf meliputi jenis fase diam, komposisi pelarut, aktivasi pelat, suhu, dan kejenuhan ruang.
Metode Visualisasi
Senyawa dapat divisualisasikan menggunakan sinar UV (254 nm atau 365 nm) untuk senyawa dengan sistem terkonjugasi atau indikator fluoresen dalam pelat, uap iodin sebagai pewarna reversibel umum untuk banyak senyawa organik, atau pewarnaan kimia dengan ninhidrin (amina), amonium molibdat serik/CAM (organik umum), atau asam fosfomolibdat/PMA (lipid).
Pemilihan Fase Gerak
Sistem pelarut dipilih berdasarkan polaritas senyawa, karena meningkatkan polaritas pelarut meningkatkan nilai Rf. Sistem pelarut umum meliputi heksana/etil asetat untuk senyawa polar sedang, diklorometana/metanol untuk senyawa polar, dan toluena/aseton untuk pemisahan khusus. Optimalisasi biasanya melibatkan trial and error: mulai dengan pelarut polaritas sedang dan sesuaikan berdasarkan nilai Rf yang diamati, targetkan Rf 0,3-0,7.
Aplikasi
TLC digunakan untuk memantau kemajuan reaksi kimia dan memeriksa penyelesaiannya, menilai kemurnian senyawa yang disintesis dan fraksi dari kromatografi kolom, mengidentifikasi senyawa dengan co-spotting dengan standar autentik, dan penyaringan awal ekstrak tanaman dan isolat produk alami.
