As enzimas oxidativas (desidrogenases, oxidases) e hidrolíticas (fosfatases, esterases) são as duas classes mais importantes na enzimohistoquímica diagnóstica. Sua detecção em seções de tecido localiza a atividade metabólica em tipos celulares específicos e identifica anormalidades funcionais na doença.
Enzimas Oxidativas
NADH-tetrazólio redutase (NADH-TR) é a coloração enzimática oxidativa mais amplamente usada em patologia diagnóstica. A NADH-TR é uma enzima mitocondrial que transfere elétrons do NADH para um sal de tetrazólio (NBT), produzindo um precipitado de formazana azul. A reação está presente em virtualmente todas as células, mas é mais intensa em células com alto metabolismo oxidativo: músculo esquelético e cardíaco (fibras tipo I), túbulos renais proximais, hepatócitos. Na patologia muscular, a NADH-TR demonstra diferenciação de tipos de fibras (fibras tipo I são escuras, fibras tipo II são claras), estruturas de core (cores centrais na doença do core central aparecem como áreas sem coloração), fibras alvo (na denervação) e fibras ragged red (acúmulos mitocondriais na periferia da fibra).
Succinato desidrogenase (SDH) é uma enzima mitocondrial do ciclo de Krebs. Sua detecção histoquímica é similar à NADH-TR mas usa succinato como substrato. A atividade da SDH é mais estável que a NADH-TR e é usada para demonstrar distribuição mitocondrial. A SDH está ausente em tumores estromais gastrointestinais (GIST) deficientes em SDH e paragangliomas — a perda de atividade da SDH pela histoquímica correlaciona-se com mutações das subunidades da SDH.
Citocromo c oxidase (COX) é o complexo IV da cadeia de transporte de elétrons mitocondrial. A histoquímica da COX usa DAB (diaminobenzidina) como doador de elétrons, produzindo um produto de reação marrom. Fibras COX-negativas em biópsias musculares indicam mutações ou deleções do DNA mitocondrial. A histoquímica combinada COX-SDH (coloração sequencial) identifica fibras COX-negativas, SDH-positivas — a marca diagnóstica da miopatia mitocondrial.
Enzimas Hidrolíticas
Fosfatase ácida (ACP) é uma enzima lisossomal ativa em pH 4,5-5,5. Sua detecção histoquímica usa naftol AS-BI fosfato como substrato e hexazônio pararosanilina como reagente de captura, produzindo um produto de reação vermelho. A ACP está presente nos lisossomos de todas as células, mas é mais abundante em: macrófagos (coloração citoplasmática vermelha difusa), osteoclastos (atividade intensa, usada como marcador de osteoclasto), epitélio prostático. A fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) é específica para osteoclastos e é usada para diagnosticar doença óssea de Paget e tumores de células gigantes. Leucemia de células pilosas mostra forte atividade de ACP resistente ao tartarato (TRAP-positiva) — embora a IHQ para CD103 e BRAF V600E tenha amplamente substituído a histoquímica da TRAP.
Fosfatase alcalina (ALP) é uma enzima ligada à membrana ativa em pH 9,0-10,0. A histoquímica da ALP usa naftol AS-MX fosfato como substrato e Fast Blue BB como reagente de captura, produzindo um produto de reação azul. A ALP está presente em: osso e cartilagem (osteoblastos), fígado (canalículos biliares), rim (túbulos proximais), intestino (borda em escova) e placenta. A ALP é um marcador de diferenciação osteoblástica e é usada para avaliar formação óssea em doença óssea metabólica e cicatrização de fraturas.
Esterase não específica (ENE) detecta esterases que hidrolisam ésteres de ácidos graxos de cadeia curta. O substrato padrão é o acetato de alfa-naftila, capturado por hexazônio pararosanilina (marrom-avermelhado). A ENE está presente em: macrófagos (forte, difusa), monócitos, granulócitos (fraca) e algumas células epiteliais. A histoquímica da ENE foi historicamente usada para identificar tumores histiocíticos (sarcoma granulocítico, histiocitose de células de Langerhans), mas a IHQ para CD68, CD163 e CD1a a substituiu amplamente.
Aplicações Diagnósticas
Biópsia muscular — a combinação de NADH-TR, COX, SDH, ATPase (em pH 4,3, 4,6 e 9,4) e ACP fornece caracterização abrangente dos tipos de fibras musculares, função mitocondrial e atividade lisossomal. Este painel é essencial para diagnosticar miopatias mitocondriais, doença do core central, distrofia miotônica e miopatias inflamatórias.
Patologia óssea e articular — ALP (atividade osteoblástica), ACP/TRAP (atividade osteoclástica) e NADH-TR identificam células formadoras e reabsorvedoras de osso em doença óssea metabólica, cicatrização de fraturas e tumores ósseos.
Biópsia hepática — ALP canalicular (estase biliar), ACP (doenças de armazenamento lisossomal) e NADH-TR (função mitocondrial) fornecem informações funcionais complementares à histologia de rotina.
Todas as reações enzimohistoquímicas requerem controles rigorosos — tecido controle positivo, omissão de substrato e controles inibidores — para confirmar especificidade. Programas de garantia de qualidade documentam a demonstração bem-sucedida da atividade enzimática em cada execução.
