CRISPR/Cas9 es una tecnología revolucionaria de edición genética que permite a los científicos realizar cambios precisos en el ADN de organismos vivos. Descubierto originalmente como un sistema inmunológico bacteriano, ha sido adaptado en una herramienta versátil para la investigación genética, la medicina y la biotecnología.
Cómo funciona CRISPR/Cas9
- Diseño del ARN guía
Se diseña un ARN guía (ARNg) corto que sea complementario a la secuencia de ADN objetivo. El ARNg tiene aproximadamente 20 nucleótidos de longitud y determina dónde cortará la enzima Cas9. La secuencia objetivo debe estar seguida directamente por una secuencia motivo adyacente al protoespaciador (PAM), típicamente NGG.
- Formación del complejo
El ARNg se combina con la proteína Cas9, formando un complejo ribonucleoproteico. El ARNg actúa como un GPS, guiando a Cas9 a la ubicación exacta en el genoma que coincide con la secuencia del ARNg.
- Unión y corte del ADN
El complejo Cas9-ARNg escanea el ADN en busca de la secuencia PAM. Una vez encontrada, Cas9 desenrolla el ADN y verifica si la secuencia adyacente coincide con el ARNg. Si coincide, Cas9 crea una rotura de doble cadena en el ADN.
- Reparación del ADN
Los mecanismos naturales de reparación de la célula toman el control. Hay dos vías principales:
- Unión de extremos no homólogos (NHEJ): Los extremos rotos se vuelven a unir directamente, causando a menudo pequeñas inserciones o deleciones que interrumpen el gen.
- Reparación dirigida por homología (HDR): Si se proporciona una plantilla de reparación, la célula la utiliza para hacer ediciones precisas o insertar nuevo material genético.
- Verificación
Las células u organismos editados se analizan mediante PCR y secuenciación para confirmar que la modificación genética deseada fue exitosa.
