CRISPR/Cas9 est une technologie révolutionnaire d’édition génétique qui permet aux scientifiques d’apporter des modifications précises à l’ADN des organismes vivants. Découverte à l’origine comme un système immunitaire bactérien, elle a été adaptée en un outil polyvalent pour la recherche génétique, la médecine et la biotechnologie.
Comment Fonctionne CRISPR/Cas9
- Conception de l’ARN Guide
Un court ARN guide (ARNg) est conçu pour être complémentaire de la séquence d’ADN cible. L’ARNg mesure environ 20 nucléotides et détermine où l’enzyme Cas9 effectuera la coupure. La séquence cible doit être immédiatement suivie d’une séquence PAM (protospacer adjacent motif), généralement NGG.
- Formation du Complexe
L’ARNg est combiné avec la protéine Cas9, formant un complexe ribonucléoprotéique. L’ARNg agit comme un GPS, guidant Cas9 vers l’emplacement exact du génome qui correspond à la séquence de l’ARNg.
- Liaison et Coupure de l’ADN
Le complexe Cas9-ARNg scanne l’ADN à la recherche de la séquence PAM. Une fois trouvée, Cas9 déroule l’ADN et vérifie si la séquence adjacente correspond à l’ARNg. Si elle correspond, Cas9 crée une cassure double brin dans l’ADN.
- Réparation de l’ADN
Les mécanismes de réparation naturels de la cellule prennent le relais. Il existe deux voies principales :
- Jonction d’extrémités non homologues (NHEJ) : Les extrémités cassées sont directement réunies, provoquant souvent de petites insertions ou délétions qui perturbent le gène.
- Réparation dirigée par homologie (HDR) : Si un modèle de réparation est fourni, la cellule l’utilise pour effectuer des modifications précises ou insérer du nouveau matériel génétique.
- Vérification
Les cellules ou organismes édités sont analysés par PCR et séquençage pour confirmer que la modification génétique souhaitée a été réussie.
