Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) adalah immunoassay berbasis piring yang digunakan untuk mendeteksi dan mengkuantifikasi protein, antibodi, hormon, dan molekul lainnya. Ini menggabungkan spesifisitas antibodi dengan sensitivitas deteksi berbasis enzim.
Cara Kerja ELISA
- Pelapisan
Piring mikrotiter dilapisi dengan antigen atau antibodi penangkap. Molekul target mengikat permukaan melalui adsorpsi pasif. Piring diinkubasi semalaman dan kemudian dicuci untuk menghilangkan bahan yang tidak terikat.
- Pemblokiran
Larutan pemblokiran yang mengandung protein tidak relevan seperti BSA atau kasein ditambahkan ke sumur. Ini menutupi semua situs pengikatan yang tersisa di permukaan piring, mencegah pengikatan non-spesifik pada langkah selanjutnya.
- Antibodi Deteksi
Antibodi deteksi yang terkonjugasi ke enzim — paling umum horseradish peroxidase (HRP) atau alkaline phosphatase (AP) — ditambahkan. Dalam ELISA sandwich, antibodi primer mengikat target, dan antibodi sekunder terikat enzim mengikat antibodi primer.
- Generasi Sinyal
Substrat untuk enzim ditambahkan. Enzim mengubah substrat menjadi produk berwarna, fluoresen, atau kemiluminesen. Reaksi dibiarkan berlangsung selama waktu yang ditentukan dan kemudian dihentikan.
- Pengukuran
Sinyal diukur menggunakan pembaca piring. Intensitas sinyal sebanding dengan jumlah molekul target dalam sampel. Kurva standar menggunakan konsentrasi yang diketahui memungkinkan kuantifikasi.
- Format ELISA
- ELISA Langsung: Antigen dilapisi, dan antibodi terikat enzim mendeteksinya secara langsung.
- ELISA Tidak Langsung: Antigen dilapisi, antibodi primer mengikat, dan antibodi sekunder terikat enzim mendeteksinya.
- ELISA Sandwich: Antibodi penangkap dilapisi, antigen mengikat, dan antibodi deteksi melengkapi sandwich.
- ELISA Kompetitif: Sinyal menurun seiring peningkatan konsentrasi target.
