A coloração confere contraste a seções de tecido translúcidas, permitindo que componentes celulares e extracelulares sejam distinguidos ao microscópio de campo claro. A coloração padrão em histopatologia é a hematoxilina e eosina (H&E), mas dezenas de colorações especializadas existem para destacar estruturas específicas, microrganismos e substâncias químicas.
Hematoxilina e Eosina (H&E)
A H&E é a coloração de trabalho da histopatologia, usada em virtualmente toda seção processada de rotina. A hematoxilina, um corante básico, liga-se a estruturas ácidas (núcleos, ribossomos, retículo endoplasmático rugoso) e as cora em azul-púrpura (basofílico). A eosina, um corante ácido, liga-se a estruturas básicas (proteínas citoplasmáticas, colágeno, glóbulos vermelhos) e as cora em rosa-vermelho (eosinofílico).
Uma seção de H&E adequadamente corada mostra detalhe nuclear nítido com cromatina aberta ou condensada, nucléolos visíveis e membranas nucleares bem definidas. O citoplasma deve exibir qualidades tintoriais apropriadas — células acinares pancreáticas aparecem granulares devido aos grânulos de zimogênio, células musculares aparecem eosinofílicas e fibrilares, e a matriz cartilaginosa aparece vítrea e basofílica. Artefatos como supercoloração (núcleos turvos), subcoloração (núcleos pálidos) ou coloração irregular indicam problemas no processo de coloração ou processamento tecidual deficiente.
Colorações Especiais para Tecido Conjuntivo
Tricrômio de Masson cora colágeno em azul ou verde, músculo e citoplasma em vermelho e núcleos em preto. É usado para avaliar fibrose em doença hepática, distrofias musculares e cicatrização miocárdica.
Verhoeff-van Gieson (VVG) cora fibras elásticas em preto, colágeno em vermelho e músculo em amarelo. É essencial para avaliar doenças vasculares e distúrbios das fibras elásticas.
Coloração de reticulina (impregnação por prata) cora colágeno tipo III (fibras de reticulina) em preto. Destaca o arcabouço arquitetural dos órgãos e é crítica para diagnosticar distúrbios da medula óssea e doenças hepáticas.
Ácido Periódico-Schiff (PAS) cora glicogênio, glicoproteínas e paredes celulares fúngicas em magenta. É usado para identificar organismos fúngicos, diagnosticar doenças de armazenamento de glicogênio e destacar membranas basais em biópsias renais. PAS com diástase (PAS-D) digestão distingue glicogênio (removido pela diástase) de outro material PAS-positivo.
Colorações para Microrganismos
Coloração de Gram (adaptação tecidual) diferencia bactérias Gram-positivas (púrpura) de Gram-negativas (rosa) em seções de parafina. Diferentemente da técnica de coloração de Gram bacteriana usada em microbiologia, a coloração de Gram tecidual funciona em seções de parafina.
Ziehl-Neelsen cora bacilos álcool-ácido resistentes (Mycobacterium tuberculosis) em vermelho brilhante contra um contracorante azul ou verde.
Grocott metenamina prata (GMS) cora paredes celulares fúngicas em preto e é a coloração mais sensível para detectar fungos em tecido.
Warthin-Starry cora espiroquetas e Helicobacter pylori em preto sobre um fundo amarelo pálido.
Colorações para Grânulos Citoplasmáticos e Inclusões
Coloração de Giemsa é usada para biópsias de trefina de medula óssea para avaliar células hematopoiéticas, e pode detectar Helicobacter pylori, mastócitos e certos parasitas.
Luxol Fast Blue (LFB) cora mielina em azul-esverdeado e é usada em neuropatologia para avaliar doenças desmielinizantes.
Congo Red cora depósitos de amiloide em salmão-rosa sob iluminação de campo claro e mostra birrefringência verde-maçã sob luz polarizada — o padrão diagnóstico para amiloidose.
Histoquímica e Enzimohistoquímica
A histoquímica usa reações químicas para localizar substâncias específicas em seções de tecido. Azul da Prússia de Perls detecta ferro férrico (hemossiderina) como um precipitado azul — usado para diagnosticar distúrbios de sobrecarga de ferro. Coloração de Von Kossa detecta depósitos de cálcio (preto ou marrom) em tecidos moles. Oil Red O (em seções congeladas) cora lipídios neutros em laranja-vermelho.
A enzimohistoquímica detecta atividade enzimática in situ. Exemplos incluem fosfatase alcalina (osso e fígado), fosfatase ácida (próstata) e esterase não específica (macrófagos). Essas técnicas requerem tecido fresco ou congelado porque a fixação inativa as enzimas.
Imuno-histoquímica
A imuno-histoquímica (IHQ) usa anticorpos conjugados a enzimas (peroxidase de rábano, fosfatase alcalina) para detectar antígenos específicos em seções de tecido. A reação é visualizada com cromógenos como DAB (marrom) ou Fast Red (vermelho). A IHQ substituiu amplamente muitas colorações especiais e técnicas de enzimohistoquímica devido à sua especificidade superior. É indispensável para classificação tumoral (queratinas, marcadores CD), diagnóstico de doenças infecciosas e teste de biomarcadores preditivos (HER2, PD-L1, proteínas de reparo de incompatibilidade).
