La coloration apporte du contraste aux coupes tissulaires translucides, permettant de distinguer les composants cellulaires et extracellulaires au microscope à champ clair. La coloration standard en histopathologie est l’hématoxyline et l’éosine (H&E), mais des dizaines de colorations spéciales existent pour mettre en évidence des structures spécifiques, des micro-organismes et des substances chimiques.
Hématoxyline et Éosine (H&E)
La H&E est la coloration de travail de l’histopathologie, utilisée sur pratiquement chaque coupe traitée de routine. L’hématoxyline, un colorant basique, se lie aux structures acides (noyaux, ribosomes, réticulum endoplasmique rugueux) et les colore en bleu-violet (basophile). L’éosine, un colorant acide, se lie aux structures basiques (protéines cytoplasmiques, collagène, globules rouges) et les colore en rose-rouge (éosinophile).
Une coupe H&E correctement colorée montre des détails nucléaires nets avec une chromatine ouverte ou condensée, des nucléoles visibles et des membranes nucléaires bien définies. Le cytoplasme doit présenter des qualités tinctoriales appropriées — les cellules acineuses pancréatiques apparaissent granulaires en raison des granules de zymogène, les cellules musculaires apparaissent éosinophiles et fibrillaires, et la matrice cartilagineuse apparaît vitreuse et basophile. Les artefacts tels que la sur-coloration (noyaux boueux), la sous-coloration (noyaux pâles) ou une coloration inégale indiquent des problèmes dans le processus de coloration ou un mauvais traitement tissulaire.
Colorations Spéciales pour le Tissu Conjonctif
Trichrome de Masson colore le collagène en bleu ou vert, le muscle et le cytoplasme en rouge, et les noyaux en noir. Il est utilisé pour évaluer la fibrose dans les maladies hépatiques, les dystrophies musculaires et la cicatrisation myocardique.
Verhoeff-van Gieson (VVG) colore les fibres élastiques en noir, le collagène en rouge et le muscle en jaune. Il est essentiel pour évaluer les maladies vasculaires et les troubles des fibres élastiques.
Coloration de la réticuline (imprégnation argentique) colore le collagène de type III (fibres de réticuline) en noir. Elle met en évidence la charpente architecturale des organes et est essentielle pour diagnostiquer les troubles de la moelle osseuse et les maladies hépatiques.
Periodic Acid-Schiff (PAS) colore le glycogène, les glycoprotéines et les parois cellulaires fongiques en magenta. Il est utilisé pour identifier les organismes fongiques, diagnostiquer les maladies de stockage du glycogène et mettre en évidence les membranes basales dans les biopsies rénales. Le PAS avec diastase (PAS-D) digère le glycogène (éliminé par la diastase) pour le distinguer des autres matériaux PAS-positifs.
Colorations pour les Micro-Organismes
Coloration de Gram (adaptation tissulaire) différencie les bactéries Gram-positives (violettes) des Gram-négatives (roses) dans les coupes tissulaires. Contrairement à la technique de coloration de Gram utilisée en microbiologie, la coloration de Gram tissulaire fonctionne sur des coupes en paraffine.
Ziehl-Neelsen colore les bacilles acido-résistants (Mycobacterium tuberculosis) en rouge vif sur un fond bleu ou vert.
Grocott’s methenamine silver (GMS) colore les parois cellulaires fongiques en noir et est la coloration la plus sensible pour détecter les champignons dans les tissus.
Warthin-Starry colore les spirochètes et Helicobacter pylori en noir sur un fond jaune pâle.
Colorations pour les Granules et Inclusions Cytoplasmiques
Coloration de Giemsa est utilisée pour les biopsies de trépanation médullaire afin d’évaluer les cellules hématopoïétiques, et peut détecter Helicobacter pylori, les mastocytes et certains parasites.
Luxol Fast Blue (LFB) colore la myéline en bleu-vert et est utilisée en neuropathologie pour évaluer les maladies démyélinisantes.
Rouge Congo colore les dépôts d’amyloïde en rose-saumon sous illumination à champ clair et montre une biréfringence vert-ponme sous lumière polarisée — le standard diagnostique pour l’amyloïdose.
Histochimie et Histochimie Enzymatique
L’histochimie utilise des réactions chimiques pour localiser des substances spécifiques dans les coupes tissulaires. Bleu de Prusse de Perls détecte le fer ferrique (hémosidérine) sous forme de précipité bleu — utilisé pour diagnostiquer les troubles de surcharge en fer. Coloration de Von Kossa détecte les dépôts de calcium (noir ou brun) dans les tissus mous. Oil Red O (sur coupes congelées) colore les lipides neutres en rouge-orange.
L’histochimie enzymatique détecte l’activité enzymatique in situ. Les exemples incluent la phosphatase alcaline (os et foie), la phosphatase acide (prostate) et l’estérase non spécifique (macrophages). Ces techniques nécessitent du tissu frais ou congelé car la fixation inactive les enzymes.
Immunohistochimie
L’immunohistochimie (IHC) utilise des anticorps conjugués à des enzymes (peroxydase de raifort, phosphatase alcaline) pour détecter des antigènes spécifiques dans les coupes tissulaires. La réaction est visualisée avec des chromogènes tels que le DAB (brun) ou le Fast Red (rouge). L’IHC a largement remplacé de nombreuses colorations spéciales et techniques d’histochimie enzymatique en raison de sa spécificité supérieure. Elle est indispensable pour la classification des tumeurs (kératines, marqueurs CD), le diagnostic des maladies infectieuses et les tests de biomarqueurs prédictifs (HER2, PD-L1, protéines de réparation des mésappariements).
