从转化数据估算噬菌体展示文库的理论多样性，模拟生物淘选过程中逐轮富集，并根据紫外吸光度计算噬菌体颗粒浓度。文库多样性取决于独立转化子数量、连接效率和载体与插入片段比例。淘选富集受输入滴度、靶标浓度、洗涤严谨性和洗脱效率的影响——典型筛选需要3-5轮才能从非结合噬菌体背景中富集特异性结合物。噬菌体颗粒浓度通过测量269 nm和320 nm处的校正吸光度进行分光光度测定。

关于噬菌体展示文库和淘选

噬菌体展示将展示的蛋白质（表型）与其编码DNA（基因型）连接在丝状噬菌体颗粒内。文库以其多样性为特征——即独特克隆的数量。一个好的免疫抗体文库通常包含10^7–10^8个独特克隆，而合成或天然文库可以达到10^9–10^11。文库大小受转化效率和连接产率的限制。

淘选通过靶标暴露、洗涤、洗脱和扩增的迭代轮次筛选结合克隆。每一轮逐步富集高亲和力结合物。通过跟踪输入和输出滴度（或多克隆噬菌体ELISA）监测富集对于确定何时分离单个克隆进行表征至关重要。

关于噬菌体颗粒定量

可以通过测量纯化噬菌体制剂在269 nm和320 nm处的紫外吸光度，用分光光度法测定噬菌体颗粒浓度。320 nm处的校正补偿了噬菌体颗粒的光散射。校正吸光度（A269 − A320）乘以稀释因子得到噬菌体制剂的光密度。然后使用以下公式计算病毒颗粒浓度：

病毒颗粒/mL = (A269 − A320) × 稀释 × 6×10^16 / 基因组长度（碱基）

此方法需要了解噬菌体基因组长度，包括任何插入片段。对于M13来源的噬菌粒颗粒，典型基因组长度约为6400个碱基（载体+插入片段）。6407碱基的默认值对应于M13KO7辅助噬菌体。