La electroforesis en gel de agarosa es una técnica fundamental de laboratorio utilizada para separar fragmentos de ADN según su tamaño. Cuando los científicos necesitan analizar ADN después de una digestión con enzimas de restricción, PCR o purificación, recurren a la electroforesis en gel para visualizar los resultados.
Cómo funciona la electroforesis en gel de agarosa
La técnica se basa en el hecho de que el ADN tiene carga negativa y migra hacia un electrodo positivo cuando se coloca en un campo eléctrico.
- Preparación del gel
El polvo de agarosa se mezcla con tampón TAE o TBE (generalmente 1× TAE o 0,5× TBE) y se calienta hasta que se disuelve. La agarosa fundida se vierte en una bandeja con un peine insertado para crear los pocillos. Al enfriarse, se solidifica formando una matriz de gel porosa.
- Carga de las muestras
Las muestras de ADN se mezclan con un colorante de carga que contiene glicerol (para que se hundan) y colorantes indicadores (para monitorear la migración). Las muestras se pipetean en los pocillos del gel. Un marcador de peso molecular—una mezcla de fragmentos de tamaños conocidos—se carga en el primer pocillo como referencia de tamaño.
- Electroforesis
Se aplica una corriente eléctrica a través del gel. Como el ADN tiene carga negativa, los fragmentos se mueven a través del gel hacia el electrodo positivo. Los fragmentos más pequeños navegan fácilmente por los poros del gel y viajan rápidamente, mientras que los fragmentos más grandes se mueven más lentamente. Con el tiempo, los fragmentos se separan en bandas distintas según su tamaño.
- Visualización
Después de la electroforesis, el gel se tiñe con un colorante de unión al ADN como bromuro de etidio o SYBR Safe. Al colocarlo bajo luz UV, el colorante fluorescente revela las bandas de ADN. Al comparar las posiciones de las bandas con el marcador de peso molecular, los científicos pueden determinar el tamaño de cada fragmento.
