La cuantificación de proteínas es el proceso de determinar la concentración de proteína en una solución. La cuantificación precisa de proteínas es esencial para muchas aplicaciones posteriores, incluyendo SDS-PAGE, Western blotting, ensayos enzimáticos y estudios estructurales.

Métodos Comunes de Cuantificación de Proteínas

Ensayo de Bradford

El ensayo de Bradford se basa en la unión del colorante Azul Brillante de Coomassie G-250 a las proteínas. El colorante cambia de marrón a azul cuando se une a la proteína, con el máximo de absorbancia cambiando de 465 nm a 595 nm. El ensayo es rápido, simple y compatible con la mayoría de los tampones. Es menos preciso en presencia de detergentes.

Ensayo de BCA

El ensayo del ácido bicinconínico (BCA) se basa en la reducción de Cu2+ a Cu1+ por las proteínas en un medio alcalino. El BCA luego quelata el Cu1+, formando un color púrpura que absorbe a 562 nm. El ensayo de BCA es más tolerante a los detergentes que el ensayo de Bradford pero es menos compatible con agentes reductores.

Ensayo de Lowry

El ensayo de Lowry combina la reacción de biuret (quelación de cobre) con el reactivo de Folin-Ciocalteu, que reacciona con los residuos de tirosina y triptófano. Produce un color azul medido a 750 nm. Es sensible pero requiere un tiempo cuidadoso y se ve afectado por muchas sustancias interferentes.

Absorbancia UV (A280)

Las proteínas absorben luz UV a 280 nm debido a los residuos de triptófano y tirosina. La absorbancia a 280 nm proporciona una estimación rápida y no destructiva de la concentración de proteína. Es más precisa para proteínas puras con coeficientes de extinción conocidos.

Curva Estándar

Todos los ensayos colorimétricos requieren una curva estándar. Se preparan y miden diluciones seriadas de un estándar de proteína conocido, típicamente albúmina de suero bovino (BSA). La absorbancia de la muestra desconocida se compara con la curva estándar para calcular su concentración.