L’électrophorèse sur gel d’agarose est une technique de laboratoire fondamentale utilisée pour séparer les fragments d’ADN en fonction de leur taille. Lorsque les scientifiques ont besoin d’analyser l’ADN après une digestion par restriction, une PCR ou une purification, ils utilisent l’électrophorèse sur gel pour visualiser les résultats.
Comment Fonctionne l’Électrophorèse sur Gel d’Agarose
La technique repose sur le fait que l’ADN est chargé négativement et migre vers une électrode positive lorsqu’il est placé dans un champ électrique.
- Préparation du Gel
La poudre d’agarose est mélangée avec du tampon TAE ou TBE (généralement 1× TAE ou 0,5× TBE) et chauffée jusqu’à dissolution. L’agarose fondu est coulé dans un moule avec un peigne inséré pour créer des puits. En refroidissant, il se solidifie en une matrice de gel poreuse.
- Chargement des Échantillons
Les échantillons d’ADN sont mélangés avec un colorant de charge contenant du glycérol (pour les faire couler) et des colorants de suivi (pour surveiller la migration). Les échantillons sont déposés dans les puits du gel. Un marqueur de poids moléculaire — un mélange de fragments de tailles connues — est chargé dans le premier puits comme référence de taille.
- Électrophorèse
Un courant électrique est appliqué à travers le gel. Comme l’ADN est chargé négativement, les fragments se déplacent dans le gel vers l’électrode positive. Les petits fragments traversent facilement les pores du gel et se déplacent rapidement, tandis que les gros fragments se déplacent plus lentement. Avec le temps, les fragments se séparent en bandes distinctes en fonction de leur taille.
- Visualisation
Après l’électrophorèse, le gel est coloré avec un colorant se liant à l’ADN tel que le bromure d’éthidium ou le SYBR Safe. Lorsqu’il est placé sous lumière UV, le colorant fluoresce, révélant les bandes d’ADN. En comparant les positions des bandes au marqueur de poids moléculaire, les scientifiques peuvent déterminer la taille de chaque fragment.
