Le Northern Blot est une technique de laboratoire utilisée pour détecter et quantifier des molécules d’ARN spécifiques dans un échantillon biologique. Alors qu’un Western blot examine les protéines et un Southern blot l’ADN, le Northern blot indique aux scientifiques quels gènes sont réellement « activés » (exprimés) dans une cellule à un moment donné. En mesurant la quantité d’ARN messager (ARNm), les chercheurs peuvent déterminer si une maladie, un médicament ou un changement environnemental amène une cellule à augmenter ou diminuer la production d’instructions spécifiques.
Comment Fonctionne le Northern Blotting
L’ARN est notoirement fragile et sujet à la dégradation par des enzymes appelées RNases qui sont partout — même sur le bout des doigts. Pour cette raison, le processus nécessite des soins extrêmes et des conditions « propres ».
- Séparation de l’ARN
L’ARN total est extrait des cellules et séparé par taille en utilisant l’électrophorèse sur gel. Comme l’ARN est simple brin, il a tendance à se replier en formes complexes ; pour éviter cela, un agent « dénaturant » (comme le formaldéhyde) est ajouté au gel pour maintenir les molécules d’ARN linéaires afin qu’elles se déplacent strictement selon leur longueur.
- Transfert
Comme dans un Western blot, les brins d’ARN séparés sont transférés du gel fragile vers une membrane solide en nylon ou nitrocellulose. Cela se fait souvent par capillarité, où une pile de serviettes en papier aspire le tampon SSC (saline-sodium citrate) à travers le gel et la membrane, entraînant l’ARN avec lui et le piégeant à la surface de la membrane.
- Hybridation
La membrane est exposée à une sonde — un court morceau d’ARN ou d’ADN simple brin complémentaire de la séquence cible. Cette sonde est « marquée » avec un atome radioactif ou un colorant fluorescent. La sonde scanne la membrane et se lie (s’hybride) uniquement à son partenaire ARN correspondant, ignorant tout le « bruit » ARN environnant.
- Détection
Après avoir lavé les sondes non liées, la membrane est placée contre un film radiographique ou scannée avec un imageur numérique. Les sondes marquées créent des bandes sombres ou des lignes lumineuses. L’épaisseur et l’intensité de la bande indiquent au scientifique exactement quelle quantité de cet ARNm spécifique était présente dans l’échantillon d’origine.
