Irisan beku adalah metode diagnosis jaringan cepat yang dilakukan saat pasien dalam anestesi. Metode ini melewati siklus pemrosesan jaringan standar 12-24 jam dengan membekukan jaringan, memotong irisan pada kriostat, mewarnainya, dan melaporkan oleh patolog dalam 15-20 menit. Hasilnya langsung mempengaruhi prosedur bedah — menentukan apakah margin bersih, apakah kelenjar getah bening mengandung tumor, atau apakah jaringan diagnostik yang cukup telah diperoleh.
Kriostat
Kriostat adalah mikrotom putar yang ditempatkan dalam kabinet berpendingin yang dipertahankan pada -20 hingga -30°C. Jaringan segar tanpa fiksasi ditempatkan pada chuck logam dengan medium embedding (senyawa OCT — suhu potong optimal), dibekukan dengan cepat dengan merendam chuck dalam nitrogen cair atau dengan menempatkannya pada batang beku cepat, kemudian dipotong pada ketebalan 4-10 µm. Irisan diambil pada kaca objek pada suhu kamar, yang langsung memfiksasi jaringan dengan melelehkan irisan beku ke kaca.
Indikasi Irisan Beku
Penilaian margin adalah indikasi paling umum. Dalam operasi kanker, ahli bedah perlu tahu apakah margin reseksi bebas tumor. Jika irisan beku menunjukkan tumor di margin, ahli bedah dapat mereseksi jaringan tambahan segera, menghindari operasi kedua.
Evaluasi kelenjar getah bening untuk biopsi kelenjar getah bening sentinel pada melanoma dan kanker payudara menentukan apakah tumor telah bermetastasis, memandu luasnya diseksi kelenjar getah bening.
Identifikasi jaringan memastikan bahwa spesimen mengandung jaringan diagnostik — terutama penting untuk adenoma paratiroid (membedakannya dari tiroid, kelenjar getah bening, atau lemak), identifikasi saraf selama mikrosurgeri, dan konfirmasi bahwa jaringan dari lesi dalam telah diperoleh untuk irisan permanen.
Klasifikasi lesi yang tidak diketahui dapat memandu pendekatan bedah segera — membedakan proses inflamasi dari neoplastik, dan dalam neoplasma, membedakan jinak dari ganas.
Teknik dan Pewarnaan
Irisan beku biasanya diwarnai dengan protokol H&E cepat: hematoksilin selama 30-60 detik, diikuti eosin selama 15-30 detik, dengan langkah dehidrasi dan penjernihan singkat. Seluruh siklus pewarnaan memakan waktu 2-3 menit. Beberapa laboratorium juga menggunakan toluidine blue (untuk sel mast dan serat saraf) atau methylene blue (untuk identifikasi paratiroid).
Mutu dan Keterbatasan
Kualitas irisan beku secara inheren lebih rendah daripada irisan permanen (parafin). Proses pembekuan menciptakan artefak kristal es yang mengganggu struktur sel, membuat detail inti lebih kasar dan kurang jelas. Ketebalan irisan lebih besar (6-10 µm vs. 3-5 µm untuk parafin), mengurangi resolusi optik. Jaringan adiposa dan spesimen yang sangat terkalsifikasi tidak dapat dipotong dengan baik.
Akurasi diagnostik irisan beku berkisar 94-98% bila dilakukan oleh patolog berpengalaman pada spesimen yang sesuai. Negatif palsu paling sering terjadi ketika area yang diminati (misalnya, deposit tumor kecil di kelenjar getah bening) tidak termasuk dalam blok irisan beku. Positif palsu jarang terjadi tetapi dapat disebabkan oleh interpretasi atipia reaktif sebagai keganasan. Beberapa diagnosis tidak dapat diberikan pada irisan beku: grading definitif banyak tumor, diagnosis gangguan limfoproliferatif, dan penilaian invasi kapsul pada tumor tiroid biasanya ditunda ke irisan permanen.
Artefak Spesifik Irisan Beku
Kristal es muncul sebagai ruang sudut kosong di dalam jaringan, mendistorsi arsitektur. Pembekuan cepat (nitrogen cair) meminimalkan pembentukan kristal es dibandingkan pembekuan lambat di ruang kriostat.
Garis fraktur terjadi ketika jaringan terlalu keras atau terlalu dingin, menyebabkan irisan retak selama pemotongan. Menghangatkan blok sedikit atau memotong lebih lambat dapat membantu.
Lipatan dan kerutan lebih umum pada irisan beku daripada irisan parafin karena irisan lebih tebal dan kurang melekat pada kaca objek.
Artefak pembekuan pada jaringan adiposa membuat lemak tampak sebagai vakuola kosong dengan septa tipis dan terputus, membatasi evaluasi lesi berlemak.
Diagnosis Tertunda dan Irisan Permanen
Setelah irisan beku, jaringan yang tersisa dicairkan, difiksasi dalam formalin, dan diproses secara rutin untuk irisan parafin permanen. Diagnosis irisan permanen menggantikan diagnosis irisan beku. Perbedaan antara diagnosis beku dan permanen ditinjau pada konferensi jaminan mutu. Irisan beku adalah konsultasi, bukan diagnosis akhir — perbedaan ini sangat penting untuk keselamatan pasien dan dokumentasi medikolegal.
