Pewarnaan memberikan kontras pada irisan jaringan tembus cahaya, memungkinkan komponen seluler dan ekstraseluler dibedakan di bawah mikroskop medan terang. Pewarnaan standar dalam histopatologi adalah hematoksilin dan eosin (H&E), tetapi ada puluhan pewarnaan khusus untuk menyoroti struktur spesifik, mikroorganisme, dan zat kimia.
Hematoksilin dan Eosin (H&E)
H&E adalah pewarnaan andalan histopatologi, digunakan pada hampir setiap irisan yang diproses secara rutin. Hematoksilin, pewarna basa, berikatan dengan struktur asam (inti, ribosom, retikulum endoplasma kasar) dan mewarnainya biru-ungu (basofilik). Eosin, pewarna asam, berikatan dengan struktur basa (protein sitoplasma, kolagen, sel darah merah) dan mewarnainya merah muda-merah (eosinofilik).
Irisan H&E yang diwarnai dengan baik menunjukkan detail inti yang tajam dengan kromatin terbuka atau terkondensasi, nukleolus terlihat, dan membran inti yang jelas. Sitoplasma harus menunjukkan kualitas tinctorial yang sesuai — sel asinar pankreas tampak granular karena granula zymogen, sel otot tampak eosinofilik dan fibrilar, dan matriks tulang rawan tampak seperti kaca dan basofilik. Artefak seperti pewarnaan berlebih (inti keruh), pewarnaan kurang (inti pucat), atau pewarnaan tidak merata mengindikasikan masalah dalam proses pewarnaan atau pemrosesan jaringan yang buruk.
Pewarnaan Khusus untuk Jaringan Ikat
Masson’s Trichrome mewarnai kolagen biru atau hijau, otot dan sitoplasma merah, dan inti hitam. Ini digunakan untuk mengevaluasi fibrosis pada penyakit hati, distrofi otot, dan jaringan parut miokard.
Verhoeff-van Gieson (VVG) mewarnai serat elastis hitam, kolagen merah, dan otot kuning. Ini penting untuk menilai penyakit vaskular dan gangguan serat elastis.
Pewarnaan retikulin (impregnasi perak) mewarnai kolagen tipe III (serat retikulin) hitam. Ini menyoroti kerangka arsitektural organ dan sangat penting untuk mendiagnosis gangguan sumsum tulang dan penyakit hati.
Periodic Acid-Schiff (PAS) mewarnai glikogen, glikoprotein, dan dinding sel jamur magenta. Ini digunakan untuk mengidentifikasi organisme jamur, mendiagnosis penyakit penyimpanan glikogen, dan menyoroti membran basal dalam biopsi ginjal. PAS dengan diastase (PAS-D) mencerna glikogen (dihilangkan oleh diastase) dari material PAS-positif lainnya.
Pewarnaan untuk Mikroorganisme
Pewarnaan Gram (adaptasi jaringan) membedakan bakteri Gram-positif (ungu) dari Gram-negatif (merah muda) dalam irisan jaringan. Berbeda dengan teknik pewarnaan Gram yang digunakan dalam mikrobiologi, pewarnaan Gram jaringan bekerja pada irisan parafin.
Ziehl-Neelsen mewarnai basil tahan asam (Mycobacterium tuberculosis) merah terang dengan latar belakang biru atau hijau.
Grocott’s methenamine silver (GMS) mewarnai dinding sel jamur hitam dan merupakan pewarnaan paling sensitif untuk mendeteksi jamur dalam jaringan.
Warthin-Starry mewarnai spiroketa dan Helicobacter pylori hitam dengan latar belakang kuning pucat.
Pewarnaan untuk Granula Sitoplasma dan Inklusi
Pewarnaan Giemsa digunakan untuk biopsi trefin sumsum tulang untuk mengevaluasi sel hematopoietik, dan dapat mendeteksi Helicobacter pylori, sel mast, dan parasit tertentu.
Luxol Fast Blue (LFB) mewarnai mielin biru-hijau dan digunakan dalam neuropatologi untuk menilai penyakit demielinasi.
Congo Red mewarnai deposit amiloid merah muda salmon di bawah pencahayaan medan terang dan menunjukkan birefringensi hijau-apel di bawah cahaya terpolarisasi — standar diagnostik untuk amiloidosis.
Histokimia dan Histokimia Enzim
Histokimia menggunakan reaksi kimia untuk melokalisasi zat spesifik dalam irisan jaringan. Perls’ Prussian Blue mendeteksi besi ferri (hemosiderin) sebagai endapan biru — digunakan untuk mendiagnosis gangguan kelebihan besi. Pewarnaan Von Kossa mendeteksi deposit kalsium (hitam atau coklat) di jaringan lunak. Oil Red O (pada irisan beku) mewarnai lipid netral oranye-merah.
Histokimia enzim mendeteksi aktivitas enzimatik in situ. Contohnya termasuk alkalin fosfatase (tulang dan hati), asam fosfatase (prostat), dan esterase non-spesifik (makrofag). Teknik ini memerlukan jaringan segar atau beku karena fiksasi menginaktivasi enzim.
Imunohistokimia
Imunohistokimia (IHC) menggunakan antibodi yang dikonjugasi ke enzim (horseradish peroxidase, alkalin fosfatase) untuk mendeteksi antigen spesifik dalam irisan jaringan. Reaksi divisualisasikan dengan kromogen seperti DAB (coklat) atau Fast Red (merah). IHC sebagian besar telah menggantikan banyak pewarnaan khusus dan teknik histokimia enzim karena spesifisitasnya yang unggul. Ini sangat diperlukan untuk klasifikasi tumor (keratin, penanda CD), diagnosis penyakit infeksi, dan pengujian biomarker prediktif (HER2, PD-L1, protein perbaikan ketidakcocokan).
