Amiloide, pigmentos e depósitos minerais acumulam-se em tecidos em uma ampla gama de doenças. Sua identificação histoquímica fornece diagnósticos específicos que frequentemente não podem ser feitos por nenhuma outra técnica.
Congo Red para Amiloide
O Congo Red é a coloração histoquímica padrão para amiloide. Em solução alcalina, o Congo Red liga-se à estrutura de folha beta pregueada das fibrilas amiloides via intercalação entre fitas beta adjacentes. Sob microscopia de campo claro, os depósitos de amiloide coram em salmão-rosa a vermelho. O achado diagnóstico é a birrefringência verde-maçã sob polarizadores cruzados — o resultado de moléculas de Congo Red alinhadas ao longo das fibrilas amiloides, que são elas próprias dispostas em um arranjo birrefringente altamente ordenado.
Os tipos de amiloide (AL, AA, ATTR, Aβ, etc.) não podem ser distinguidos apenas pelo Congo Red — IHQ para subtipos de amiloide (cadeias leves kappa e lambda, amiloide sérico A, transtirretina, beta-amiloide) ou espectrometria de massa é necessária para tipagem. A sensibilidade do Congo Red é alta para grandes depósitos, mas pode perder depósitos precoces ou pequenos — examine múltiplas seções sob polarização. A ligação falso-positiva do Congo Red pode ocorrer em fibras elásticas, colágeno e hialina — apenas a birrefringência verde-maçã confirma amiloide.
Tioflavina T
A tioflavina T é um corante fluorescente que se liga ao amiloide e mostra fluorescência aumentada com um deslocamento de emissão característico. É mais sensível que o Congo Red para detectar pequenos depósitos amiloides, mas requer um microscópio de fluorescência e é menos específica. O Congo Red permanece o padrão ouro para diagnóstico de amiloide.
Azul da Prússia de Perls para Ferro
O Azul da Prússia de Perls detecta ferro férrico (Fe3+) em seções de tecido. As seções são tratadas com ácido clorídrico e ferricianeto de potássio; os íons férricos reagem com o ferricianeto para formar azul da Prússia insolúvel (ferricianeto férrico). A reação produz um precipitado azul no local do ferro. O fundo é tipicamente contracorado com vermelho rápido nuclear.
A coloração de Perls identifica hemossiderina (ferritina agregada) em condições de sobrecarga de ferro: hemocromatose hereditária (ferro em hepatócitos), siderose relacionada a transfusão, doença hepática alcoólica e anemias hemolíticas. Na medula óssea, Perls gradua o ferro corável (escala 0-6). No pulmão, Perls demonstra células de insuficiência cardíaca (macrófagos carregados de hemossiderina) em congestão pulmonar e confirma hemossiderose pulmonar. No baço e linfonodos, a deposição de ferro após hemorragia ou infarto é facilmente identificada.
Von Kossa para Cálcio
A coloração de Von Kossa detecta depósitos de cálcio substituindo íons de prata por cálcio em sais de cálcio insolúveis (fosfato, carbonato). Sob luz ultravioleta ou luz brilhante, a prata é reduzida a prata metálica, aparecendo preta ou marrom. O fundo é contracorado com vermelho rápido nuclear ou van Gieson.
Von Kossa é usado para demonstrar calcificação patológica: calcificação distrófica em tecido necrótico, tumores (corpos psamomatosos em meningioma, carcinoma papilífero de tireoide, carcinoma seroso de ovário), válvulas cardíacas calcificadas e tendinite calcífica. Também identifica calcificação metastática (deposição de cálcio em tecidos normais devido à hipercalcemia) no rim, pulmão e mucosa gástrica. Von Kossa não detecta oxalato de cálcio — para oxalato, use Alizarina Vermelha S em pH 4,0 ou luz polarizada (cristais de oxalato são birrefringentes).
Alizarina Vermelha S para Cálcio
A Alizarina Vermelha S forma um precipitado laranja-vermelho com íons de cálcio em pH alcalino (4,0-4,5). É mais específica para cálcio que Von Kossa e detecta tanto fosfato de cálcio quanto oxalato de cálcio. A Alizarina Vermelha é usada para identificar depósitos de cálcio em tecidos moles, calcificação vascular e nefrocalcinose. É também a coloração padrão para identificar cálcio em seções histológicas de osso e dentes.
Colorações de Bilirrubina e Bile
Coloração de Fouchet (ácido tricloroacético e cloreto férrico) oxida a bilirrubina a biliverdina verde, depois verde/azul para a cor verde-esmeralda da bile. É usada para identificar colestase intra-hepática e extra-hepática em biópsias hepáticas e trombos biliares em canalículos. Coloração de Hall (Van Gieson com Fouchet) cora simultaneamente bile (verde/azul) e colágeno (vermelho). O pigmento biliar deve ser distinguido de lipofuscina (pigmento de idade) e hemossiderina — Perls cora ferro em azul, e PAS cora lipofuscina variavelmente.
Descoloração de Melanina
A melanina é um pigmento endógeno marrom-escuro que pode obscurecer o detalhe celular e a interpretação da IHQ. O branqueamento de melanina (permanganato de potássio seguido por ácido oxálico) remove a melanina sem danificar a morfologia tecidual ou antigenicidade, permitindo avaliação do detalhe celular abaixo de depósitos pesados de melanina. Seções branqueadas podem ser usadas para IHQ após otimização do protocolo.
Controle de Qualidade
Cada coloração especial requer controles positivos apropriados processados concomitantemente: tecido contendo amiloide (Congo Red), fígado com sobrecarga de ferro (Perls’), artéria calcificada (Von Kossa) e fígado com bile (Fouchet). A falha do controle invalida a execução. Procedimentos padrão de solução de problemas se aplicam — se os controles estiverem fracos, verifique o frescor do reagente, pH e tempos de incubação.
