A inclusão é a etapa que apresenta o tecido processado na orientação correta para o corte. O biobanco garante que o tecido excedente, blocos e lâminas sejam preservados sob condições que mantenham seu valor diagnóstico e de pesquisa por décadas.

O Processo de Inclusão

A inclusão converte o tecido infiltrado em um bloco sólido de parafina que pode ser fixado em um mandril de micrótomo. O processo usa uma central de inclusão — uma plataforma aquecida (60-65°C) com dispensadores de parafina fundida, uma placa fria (-5 a -10°C) para solidificação rápida e pinças aquecidas à mesma temperatura da parafina.

Etapas: um molde metálico (molde base) de tamanho apropriado é preenchido com parafina fundida. A seção de tecido é transferida do cassete para a parafina usando pinças aquecidas. O tecido é orientado de modo que a superfície a ser seccionada fique voltada para baixo (o fundo do molde torna-se a superfície de corte). O cassete de tecido rotulado é colocado sobre o molde, e parafina adicional é dispensada para preencher o cassete. O molde é colocado na placa fria; a solidificação começa dentro de 2-3 minutos. Após o endurecimento completo (5-10 minutos), o bloco é removido do molde.

Orientação por Tipo de Tecido

A orientação correta maximiza a informação diagnóstica. Excisões de pele — incluídas em pé para mostrar epiderme, derme e tecido subcutâneo em uma única seção. Biópsias gastrointestinais — incluídas em pé para mostrar espessura mucosal completa do epitélio superficial à muscular da mucosa. Biópsias por agulha grossa — incluídas paralelamente à superfície de corte, múltiplos núcleos alinhados em paralelo no mesmo plano. Biópsias pequenas fragmentadas — envoltas em papel de lente ou pré-incluídas em ágar antes do processamento para evitar perda de fragmentos pequenos.

Avaliação de margem requer inclusão en face (perpendicular) das seções de margem para que a superfície corada seja seccionada na face de corte. Linfonodos — bissecionados se >5 mm; incluídos com a superfície de corte para baixo para maximizar o parênquima linfonodal na seção.

Armazenamento de Blocos de Parafina

Os blocos de parafina são o material de arquivo primário em histopatologia. Eles armazenam indefinidamente à temperatura ambiente — a parafina é quimicamente inerte e os blocos permanecem seccionáveis por décadas. Condições de armazenamento: fresco (15-25°C), seco (evitar umidade que favorece mofo) e escuro (a luz degrada alguns antígenos). Os blocos são armazenados em sistemas de arquivamento rotulados — numericamente por número de acesso — em armários à prova de fogo. O período de retenção para blocos de parafina varia por jurisdição: tipicamente 10-20 anos para blocos diagnósticos; blocos de arquivos de ensino e pesquisa podem ser mantidos indefinidamente.

Construção de Microarranjo de Tecido

Microarranjos de tecido (TMAs) permitem análise simultânea de centenas de amostras de tecido em uma única lâmina. Um arranjador de TMA remove núcleos de 0,6-2,0 mm de blocos de parafina doadores (regiões de interesse selecionadas — ex., centro tumoral, margem invasiva) e os re-inclui em um bloco receptor em um padrão de grade. Seções do TMA podem ser coradas por H&E, IHQ ou hibridização in situ para análise de alto rendimento. TMAs são amplamente usados para validação de biomarcadores, otimização de IHQ e pesquisa.

Biobanco de Tecido Congelado

O tecido congelado é o padrão ouro para análise molecular porque o congelamento preserva RNA, DNA e proteínas sem a degradação causada pela fixação em formalina. Protocolo: tecido fresco (coletado dentro de 20-30 minutos da remoção) é cortado em pedaços de 5-10 mm, colocado em um criovial e congelado rapidamente em nitrogênio líquido ou isopentano resfriado em gelo seco. O tecido congelado é armazenado a -80°C ou em fase de vapor de nitrogênio líquido (-150°C). Composto de Temperatura Ótima de Corte (OCT) é usado para incluir tecido congelado para corte em criostato.

Indicadores de qualidade para biobanco congelado incluem: tempo de isquemia fria (minutos), ciclos de congelamento-descongelamento (minimizar), temperatura de armazenamento e número de integridade do RNA (RIN > 7 para a maioria das aplicações moleculares). Controle H&E — todo bloco congelado deve ter uma seção corada por H&E para verificar o conteúdo e qualidade do tecido.

Tecido Fixado em Formalina e Incluído em Parafina (FFPE) para Pesquisa

O tecido FFPE é o recurso mais abundante para pesquisa retrospectiva porque blocos diagnósticos estão universalmente disponíveis. Ácidos nucleicos extraídos de tecido FFPE são fragmentados e quimicamente modificados (desaminação, reticulações), mas suficientes para PCR, sequenciamento direcionado e IHQ. DNA de FFPE é adequado para a maioria dos ensaios moleculares até 300 pares de bases de amplicon. RNA de FFPE é mais degradado — adequado para análise de expressão gênica direcionada, mas não para estudos transcriptômicos completos sem protocolos especializados.

Considerações Éticas e Regulatórias

O biobanco requer consentimento informado para uso de tecido excedente em pesquisa. Muitas instituições operam sob um modelo de consentimento amplo onde os pacientes consentem para pesquisa futura não especificada. Anonimização remove identificadores diretos; desidentificação substitui identificadores por um código. O uso de tecido diagnóstico para pesquisa sem consentimento requer aprovação do comitê de ética. Regulamentações (HIPAA nos EUA, GDPR na Europa, Lei de Tecidos Humanos no Reino Unido) regem o armazenamento, transferência e uso de tecidos para pesquisa. Programas de garantia de qualidade do laboratório incluem auditorias regulares do armazenamento de blocos, precisão da rotulagem e tempos de recuperação.