Las pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos (AST) son esenciales en microbiología clínica para seleccionar la terapia antibiótica adecuada y monitorear las tendencias de resistencia. Determina si un aislado bacteriano es susceptible, intermedio o resistente a agentes antimicrobianos específicos.

Método de difusión en disco (Kirby-Bauer)

Se colocan discos de papel de filtro impregnados con concentraciones estandarizadas de antibióticos sobre una placa de agar en la que se ha inoculado el organismo de prueba con una turbidez definida (estándar de McFarland 0,5). Después de 16 a 24 horas de incubación, las zonas de inhibición se miden en milímetros y se comparan con las tablas de puntos de interrupción CLSI o EUCAST. El resultado se informa como Susceptible (S), Intermedio (I) o Resistente (R), y el tamaño de la zona se correlaciona inversamente con la concentración mínima inhibitoria (CIM). Este método es simple, económico y flexible (se puede probar cualquier disco de antibióticos), pero no es adecuado para organismos exigentes o de crecimiento lento y es más cualitativo que cuantitativo.

Métodos de dilución en caldo

La microdilución en caldo se realiza en placas de microtitulación de 96 pocillos con diluciones dobles en serie de antibióticos en caldo Mueller-Hinton. Cada pocillo se inocula con aproximadamente 5x10^5 UFC/ml y la CIM es la concentración de antibiótico más baja que inhibe el crecimiento bacteriano visible después de 16 a 20 horas de incubación. La macrodilución en caldo utiliza el mismo principio en los tubos de ensayo y es adecuada para un número menor de aislados. Los valores de CIM proporcionan datos cuantitativos útiles para el análisis farmacocinético/farmacodinámico (PK/PD) y la detección de resistencia de bajo nivel.

Dilución en agar

Las placas de agar que contienen diluciones seriadas de antibióticos se inoculan con una suspensión bacteriana estandarizada utilizando un replicador (inoculador multipunto Steers o Denley). La CIM se lee como la concentración más baja que inhibe completamente el crecimiento y se pueden analizar múltiples aislados (hasta 36) simultáneamente en una sola placa. Este método se considera el estándar de referencia para la determinación de la CMI, particularmente para organismos exigentes y anaerobios.

Difusión de gradiente (Etest)

Sobre una placa de agar inoculada se coloca una tira de plástico con un gradiente continuo de antibióticos predefinido en un lado y una escala de lectura de MIC en el otro. Después de la incubación, una zona elíptica de inhibición cruza la tira en el valor MIC, leído directamente en la escala. Este método combina la conveniencia de la difusión en disco con datos cuantitativos de MIC y es útil para aislamientos únicos o cuando la dilución en caldo no es práctica.

Sistemas automatizados

Vitek 2 (bioMerieux), BD Phoenix y MicroScan WalkAway automatizan la AST mediante microdilución de caldo miniaturizada en paneles patentados con detección de crecimiento mediante turbidez o fluorescencia. Los resultados suelen estar disponibles en 4 a 12 horas, mucho más rápido que los métodos manuales. Los sistemas automatizados incluyen reglas expertas integradas para detectar patrones de resistencia inusuales y sugerir acciones correctivas.

Pruebas especializadas

La detección de betalactamasa de espectro extendido (BLEE) utiliza una prueba de disco combinada con cefotaxima y ceftazidima con y sin ácido clavulánico; un aumento ≥5 mm en el diámetro de la zona confirma la producción de BLEE. La detección de carbapenemasas se realiza utilizando el método de inactivación de carbapenemes modificado (mCIM) y el CIM modificado con EDTA (eCIM) para distinguir serina y metalocarbapenemasas. La resistencia inducible a la clindamicina (prueba D) implica colocar discos de eritromicina y clindamicina a una distancia de 15 a 20 mm; el aplanamiento de la zona de clindamicina (en forma de D) indica resistencia inducible a macrólido-lincosamida-estreptogramina B (MLSB). Se prefiere la determinación de la CMI de vancomicina mediante microdilución en caldo o Etest para detectar S. aureus intermedio con vancomicina (VISA) y VISA heterogéneo (hVISA).

Interpretación y relevancia clínica

Los puntos de corte clínicos los establecen el CLSI (Instituto de Normas Clínicas y de Laboratorio) y el EUCAST (Comité Europeo sobre Pruebas de Susceptibilidad a los Antimicrobianos) en función de las distribuciones de CIM, los datos PK/PD y los resultados clínicos. Un resultado de Susceptible (S) indica una alta probabilidad de éxito terapéutico con la dosificación estándar; Resistente (R) indica una alta probabilidad de fracaso terapéutico; e Intermedio (I) indica una eficacia incierta, que potencialmente requiere dosis más altas o rutas alternativas. Los resultados de AST guían la terapia dirigida, reduciendo el uso de antibióticos de amplio espectro y retardando el desarrollo de resistencia. Los datos acumulativos de AST (antibiogramas) se utilizan para la epidemiología local, las decisiones del formulario y el control de infecciones.