Las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana (PSA) son esenciales en microbiología clínica para seleccionar la terapia antibiótica apropiada y monitorear las tendencias de resistencia. Determinan si un aislado bacteriano es susceptible, intermedio o resistente a agentes antimicrobianos específicos.

Método de Difusión en Disco (Kirby-Bauer)

1. Discos de papel de filtro impregnados con concentraciones estandarizadas de antibióticos se colocan en una placa de agar inoculada con el organismo de prueba a una turbidez definida (estándar 0.5 McFarland).
2. Después de 16-24 horas de incubación, los halos de inhibición se miden en milímetros y se comparan con tablas de puntos de corte CLSI o EUCAST.
3. El resultado se reporta como Susceptible (S), Intermedio (I) o Resistente (R). El tamaño del halo se correlaciona inversamente con la concentración inhibitoria mínima (CIM).
4. Ventajas: Simple, económico y flexible (se puede probar cualquier disco de antibiótico). Desventajas: No adecuado para organismos de crecimiento lento o fastidiosos; cualitativo más que cuantitativo.

Métodos de Dilución en Caldo

1. La microdilución en caldo se realiza en placas de 96 pocillos con diluciones seriadas al doble de antibióticos en caldo Mueller-Hinton. Cada pocillo se inocula con aproximadamente 5x10^5 UFC/mL.
2. La CIM es la concentración más baja de antibiótico que inhibe el crecimiento bacteriano visible después de 16-20 horas de incubación.
3. La macrodilución en caldo usa el mismo principio en tubos de ensayo, adecuada para números menores de aislados.
4. Los valores de CIM proporcionan datos cuantitativos útiles para análisis farmacocinético/farmacodinámico (PK/PD) y detección de resistencia de bajo nivel.

Dilución en Agar

1. Placas de agar que contienen diluciones seriadas de antibióticos se inoculan con una suspensión bacteriana estandarizada usando un replicador (inoculador multipunto Steers o Denley).
2. La CIM se lee como la concentración más baja que inhibe completamente el crecimiento. Múltiples aislados (hasta 36) pueden probarse simultáneamente en una sola placa.
3. Considerado el estándar de referencia para determinación de CIM, particularmente para organismos fastidiosos y anaerobios.

Difusión en Gradiente (Etest)

1. Una tira de plástico con un gradiente continuo predefinido de antibiótico en un lado y una escala de lectura de CIM en el otro se coloca en una placa de agar inoculada.
2. Después de la incubación, una zona elíptica de inhibición interseca la tira en el valor de CIM, leído directamente de la escala.
3. Ventajas: Combina la conveniencia de la difusión en disco con datos cuantitativos de CIM. Útil para aislados individuales o cuando la dilución en caldo es impracticable.

Sistemas Automatizados

1. Vitek 2 (bioMerieux), BD Phoenix y MicroScan WalkAway automatizan PSA usando microdilución en caldo miniaturizada en paneles propietarios con detección de crecimiento por turbidez o fluorescencia.
2. Los resultados están típicamente disponibles en 4-12 horas, significativamente más rápido que los métodos manuales.
3. Los sistemas automatizados incluyen reglas experto integradas para detectar patrones de resistencia inusuales y sugerir acciones correctivas.

Pruebas Especializadas

1. Detección de beta-lactamasa de espectro extendido (BLEE): Prueba de disco combinado usando cefotaxima y ceftazidima con y sin ácido clavulánico; un aumento >=5 mm en el diámetro del halo confirma producción de BLEE.
2. Detección de carbapenemasa: Método de inactivación de carbapenémicos modificado (mCIM) y CIM con EDTA (eCIM) distinguen carbapenemasas de serina y metalo.
3. Resistencia inducrible a clindamicina (prueba D): Discos de eritromicina y clindamicina colocados a 15-20 mm de distancia; el aplanamiento del halo de clindamicina (forma de D) indica resistencia inducrible MLSB.
4. Determinación de CIM de vancomicina: Se prefiere microdilución en caldo o Etest para detectar S. aureus intermedio a vancomicina (VISA) y heterogéneo VISA (hVISA).

Interpretación y Relevancia Clínica

1. Los puntos de corte clínicos son establecidos por CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) y EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) basados en distribuciones de CIM, datos PK/PD y resultados clínicos.
2. Susceptible (S): Alta probabilidad de éxito terapéutico con dosis estándar. Resistente (R): Alta probabilidad de fracaso terapéutico. Intermedio (I): Eficacia incierta; puede requerir dosis más altas o vías alternativas.
3. Los resultados de PSA guían la terapia dirigida, reduciendo el uso de antibióticos de amplio espectro y frenando el desarrollo de resistencia.
4. Los datos acumulativos de PSA (antibiogramas) se usan para epidemiología local, decisiones de formulario y control de infecciones.