Le test de sensibilité aux antimicrobiens (AST) est essentiel en microbiologie clinique pour sélectionner l’antibiothérapie appropriée et surveiller les tendances de résistance. Il détermine si un isolat bactérien est sensible, intermédiaire ou résistant à des agents antimicrobiens spécifiques.

Méthode de Diffusion sur Disque (Kirby-Bauer)

Des disques de papier filtre imprégnés de concentrations standardisées d’antibiotiques sont placés sur une gélose inoculée avec l’organisme testé à une turbidité définie (standard 0,5 McFarland). Après 16-24 heures d’incubation, les zones d’inhibition sont mesurées en millimètres et comparées aux tables de seuils CLSI ou EUCAST. Le résultat est rapporté comme Sensible (S), Intermédiaire (I) ou Résistant (R), la taille de la zone étant inversement corrélée à la concentration minimale inhibitrice (CMI). Cette méthode est simple, peu coûteuse et flexible (tout disque antibiotique peut être testé), mais elle ne convient pas aux organismes à croissance lente ou exigeants et est qualitative plutôt que quantitative.

Méthodes de Dilution en Bouillon

La microdilution en bouillon est réalisée dans des plaques de microtitration à 96 puits avec des dilutions sériées doubles d’antibiotiques dans du bouillon Mueller-Hinton. Chaque puits est inoculé avec environ 5x10^5 UFC/mL, et la CMI est la plus faible concentration d’antibiotique qui inhibe la croissance bactérienne visible après 16-20 heures d’incubation. La macrodilution en bouillon utilise le même principe dans des tubes à essai et convient pour de plus petits nombres d’isolats. Les valeurs de CMI fournissent des données quantitatives utiles pour l’analyse pharmacocinétique/pharmacodynamique (PK/PD) et la détection d’une résistance de bas niveau.

Dilution sur Gélose

Des géloses contenant des dilutions sériées d’antibiotiques sont inoculées avec une suspension bactérienne standardisée à l’aide d’un réplicateur (inoculateur multipoint Steers ou Denley). La CMI est lue comme la plus faible concentration qui inhibe complètement la croissance, et plusieurs isolats (jusqu’à 36) peuvent être testés simultanément sur une seule plaque. Cette méthode est considérée comme la référence standard pour la détermination de la CMI, en particulier pour les organismes exigeants et les anaérobies.

Diffusion par Gradient (Etest)

Une bandelette en plastique avec un gradient antibiotique continu prédéfini d’un côté et une échelle de lecture de CMI de l’autre est placée sur une gélose inoculée. Après incubation, une zone d’inhibition elliptique croise la bandelette à la valeur de la CMI, lue directement sur l’échelle. Cette méthode combine la commodité de la diffusion sur disque avec des données quantitatives de CMI et est utile pour les isolats uniques ou lorsque la dilution en bouillon est peu pratique.

Systèmes Automatisés

Vitek 2 (bioMerieux), BD Phoenix et MicroScan WalkAway automatisent l’AST en utilisant une microdilution en bouillon miniaturisée dans des panels propriétaires avec détection de croissance par turbidité ou fluorescence. Les résultats sont généralement disponibles en 4-12 heures, considérablement plus rapidement que les méthodes manuelles. Les systèmes automatisés incluent des règles expertes intégrées pour détecter les profils de résistance inhabituels et suggérer des actions correctives.

Tests Spécialisés

La détection des bêta-lactamases à spectre étendu (BLSE) utilise un test de disque combiné avec le céfotaxime et la ceftazidime avec et sans acide clavulanique ; une augmentation de ≥5 mm du diamètre de la zone confirme la production de BLSE. La détection des carbapénémases est effectuée à l’aide de la méthode modifiée d’inactivation des carbapénèmes (mCIM) et de la CIM modifiée par EDTA (eCIM) pour distinguer les sérine- et métallo-carbapénémases. La résistance inductible à la clindamycine (test D) implique le placement de disques d’érythromycine et de clindamycine à 15-20 mm de distance ; l’aplatissement de la zone de clindamycine (en forme de D) indique une résistance inductible aux macrolides-lincosamides-streptogramines B (MLSB). La détermination de la CMI de la vancomycine par microdilution en bouillon ou Etest est préférée pour détecter S. aureus intermédiaire à la vancomycine (VISA) et VISA hétérogène (hVISA).

Interprétation et Pertinence Clinique

Les seuils cliniques sont établis par le CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) et l’EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) sur la base des distributions de CMI, des données PK/PD et des résultats cliniques. Un résultat Sensible (S) indique une forte probabilité de succès thérapeutique avec un dosage standard ; Résistant (R) indique une forte probabilité d’échec thérapeutique ; et Intermédiaire (I) indique une efficacité incertaine, nécessitant potentiellement des doses plus élevées ou des voies alternatives. Les résultats de l’AST guident la thérapie ciblée, réduisant l’utilisation d’antibiotiques à large spectre et ralentissant le développement de la résistance. Les données cumulatives de l’AST (antibiogrammes) sont utilisées pour l’épidémiologie locale, les décisions de formulation et le contrôle des infections.