抗菌药物敏感性试验（AST）在临床微生物学中对于选择适当的抗生素治疗和监测耐药趋势至关重要。它确定细菌分离株对特定抗菌药物是敏感、中介还是耐药。
纸片扩散法（Kirby-Bauer法）
- 将浸有标准化浓度抗生素的滤纸片放置在接种了测试菌株（0.5麦氏比浊标准）的琼脂平板上。
- 孵育16-24小时后，测量抑菌圈直径（毫米），并与CLSI或EUCAST折点表进行比较。
- 结果报告为敏感（S）、中介（I）或耐药（R）。抑菌圈大小与最低抑菌浓度（MIC）呈负相关。
- 优点：简单、经济、灵活（任何抗生素纸片均可测试）。缺点：不适用于生长缓慢或苛养菌；定性而非定量。
肉汤稀释法
- 微量肉汤稀释法在96孔微孔板中进行，使用Mueller-Hinton肉汤中抗生素的倍比稀释。每孔接种约5×10^5 CFU/mL。
- MIC是孵育16-20小时后抑制可见细菌生长的最低抗生素浓度。
- 常量肉汤稀释法在试管中使用相同原理，适用于较少的分离株。
- MIC值提供定量数据，可用于药代动力学/药效学（PK/PD）分析和低水平耐药检测。
琼脂稀释法
- 使用接种器（Steers或Denley多点接种器）将标准化细菌悬液接种到含有抗生素倍比稀释液的琼脂平板上。
- MIC读数是最完全抑制生长的最低浓度。多个分离株（最多36株）可在单个平板上同时测试。
- 被认为是MIC测定的参考标准，特别是对于苛养菌和厌氧菌。
梯度扩散法（Etest）
- 将一侧带有预定义连续抗生素梯度、另一侧带有MIC读数刻度的塑料试条放置在已接种的琼脂平板上。
- 孵育后，椭圆形抑菌圈在MIC值处与试条相交，直接从刻度读取。
- 优点：结合了纸片扩散法的便利性和定量MIC数据。适用于单个分离株或当肉汤稀释法不实用时。
自动化系统
- Vitek 2（bioMerieux）、BD Phoenix和MicroScan WalkAway使用专有板中的微型化肉汤稀释法自动化AST，通过浊度或荧光检测生长。
- 结果通常在4-12小时内获得，显著快于手工方法。
- 自动化系统包括集成专家规则，用于检测异常耐药模式并建议纠正措施。
专门化试验
- 超广谱β-内酰胺酶（ESBL）检测：使用头孢噻肟和头孢他啶加与不加克拉维酸的组合纸片试验；抑菌圈直径增加≥5 mm确认ESBL产生。
- 碳青霉烯酶检测：改良碳青霉烯灭活法（mCIM）和EDTA改良CIM（eCIM）区分丝氨酸和金属碳青霉烯酶。
- 可诱导克林霉素耐药（D试验）：红霉素和克林霉素纸片间隔15-20 mm放置；克林霉素抑菌圈扁平化（D形）指示可诱导MLSB耐药。
- 万古霉素MIC测定：优选肉汤微量稀释或Etest检测万古霉素中介金黄色葡萄球菌（VISA）和异质性VISA（hVISA）。
解释与临床意义
- 临床折点由CLSI（临床和实验室标准协会）和EUCAST（欧洲抗菌药物敏感性试验委员会）基于MIC分布、PK/PD数据和临床结果制定。
- 敏感（S）：标准剂量治疗成功可能性高。耐药（R）：治疗失败可能性高。中介（I）：疗效不确定；可能需要更高剂量或替代途径。
- AST结果指导靶向治疗，减少广谱抗生素使用并减缓耐药发展。
- 累积AST数据（抗菌谱）用于当地流行病学、处方集决策和感染控制。
