La PCR de colonias es una técnica de cribado rápido utilizada para determinar si las colonias bacterianas contienen un plásmido con el inserto de ADN correcto. En lugar de purificar el ADN plasmídico de cada colonia primero, la PCR se realiza directamente sobre una pequeña cantidad de células bacterianas.
Cómo Funciona la PCR de Colonias
- Selección de Colonias
Se recogen colonias bacterianas individuales que crecen en una placa de agar usando una punta de pipeta estéril o un palillo. Cada colonia se toca brevemente, transfiriendo una cantidad diminuta de células. La misma punta se usa para inocular tanto el tubo de PCR como una placa maestra para cultivo posterior.
- Lisis Celular
Las células bacterianas se calientan a 95°C durante varios minutos durante el paso de desnaturalización inicial de la PCR. Este tratamiento térmico lisa las células, liberando el ADN plasmídico en la mezcla de reacción. El ADN liberado sirve entonces como molde para la amplificación.
- Amplificación por PCR
Se utilizan cebadores que flanquean la región del inserto en el plásmido. Si la colonia contiene un plásmido con el inserto correcto, la PCR producirá una banda del tamaño esperado. Si el plásmido está vacío (sin inserto), la banda será más pequeña. Si la colonia no contiene el plásmido, no se producirá ninguna banda.
- Análisis en Gel
Los productos de PCR se analizan mediante electroforesis en gel de agarosa. Las colonias que producen una banda del tamaño de inserto esperado se identifican como positivas. Estas colonias pueden entonces cultivarse para purificación del plásmido y análisis adicional.
- Ventajas
La PCR de colonias es rápida y económica, permitiendo cribar docenas de colonias en pocas horas. Elimina la necesidad de purificar plásmidos antes del cribado y es un primer paso estándar en los flujos de trabajo de clonación molecular.
