Setelah fiksasi, jaringan harus diinfiltrasi dengan medium pendukung — biasanya parafin — untuk memungkinkan pemotongan tipis. Pemroses jaringan otomatis membawa jaringan melalui bak reagen sekuensial selama 8-24 jam, menggantikan air dengan parafin melalui tiga tahap: dehidrasi, penjernihan, dan infiltrasi.

Pemroses Jaringan

Pemroses jaringan modern adalah instrumen tertutup dan berventilasi yang memindahkan keranjang kaset jaringan melalui serangkaian stasiun reagen. Pemroses tipe carousel (Leica ASP300, Thermo Excelsior) memutar keranjang melalui wadah reagen individu. Pemroses celup-dan-putar menurunkan keranjang ke dalam satu retort yang secara sekuensial mengisi dan mengosongkan dengan setiap reagen. Kedua tipe termasuk siklus vakum/tekanan selama infiltrasi parafin yang memaksa lilin masuk ke dalam rongga jaringan dan menghilangkan udara sisa.

Pemroses menampung 100-400 kaset per proses. Protokol semalam tipikal (14-16 jam) memproses semua biopsi rutin dan reseksi kecil. Protokol “cepat” yang lebih pendek (4-8 jam) digunakan untuk pemrosesan hari yang sama untuk spesimen mendesak, sisa irisan beku, dan biopsi kecil. Protokol dipilih berdasarkan tipe dan ukuran jaringan.

Dehidrasi

Air tidak dapat bercampur dengan parafin dan harus dihilangkan sepenuhnya. Dehidrasi menggunakan etanol bertingkat (70%, 80%, 95%, 100%) dalam konsentrasi meningkat. Dimulai dengan etanol 70% mencegah syok osmotik dan penyusutan berlebihan. Langkah etanol 100% adalah yang paling kritis — air sisa akan mencegah infiltrasi parafin dan menghasilkan blok rapuh yang sulit dipotong. Etanol absolut mengandung <1% air; harus sering diganti (setiap 50-100 proses) untuk mempertahankan efektivitas.

Artefak dehidrasi: dehidrasi tidak lengkap (blok lunak, berbutir), dehidrasi berlebihan (penyusutan dan pengerasan berlebihan biopsi kecil), dan terbawanya air dari etanol ke agen penjernih (reagen penjernih keruh).

Penjernihan

Agen penjernih dapat bercampur dengan etanol dan parafin. Mereka menggantikan etanol dalam jaringan dan membuat spesimen tembus cahaya (karena itu “penjernihan” — jaringan tampak jernih karena indeks bias cocok dengan agen penjernih). Xylene adalah agen penjernih universal — berkinerja baik tetapi memerlukan penanganan sebagai pelarut berbahaya (neurotoksik, mudah terbakar). Substitusi termasuk isopropanol, agen penjernih berbasis limonena (HistoClear, Citrisolv), dan dibutil ftalat. Substitusi xylene menjernihkan lebih lambat dan dapat meninggalkan sisa agen penjernih dalam jaringan.

Artefak penjernihan: penjernihan tidak lengkap (bintik buram, putih di blok — jaringan masih mengandung etanol atau air) dan penjernihan berlebihan (pengerasan berlebihan, terutama jaringan berlemak).

Infiltrasi Parafin

Agen penjernih secara bertahap diganti dengan parafin cair (titik leleh 56-60°C). Pemroses memindahkan keranjang melalui dua hingga tiga bak parafin, masing-masing 1-2 jam, di bawah vakum. Infiltrasi vakum (15-25 inci Hg) menghilangkan sisa agen penjernih dan udara dari rongga jaringan, memastikan penetrasi lengkap. Parafin segar di stasiun akhir menghasilkan blok paling bersih.

Kualitas parafin mempengaruhi pemotongan. Aditif parafin termasuk DMSO (meningkatkan infiltrasi), resin (meningkatkan pemotongan jaringan keras), dan polimer plastik (meningkatkan kontinuitas pita). Parafin ideal memiliki rentang leleh sempit, adhesi baik ke jaringan, dan pembentukan kristal minimal ketika didinginkan.

Pemilihan Protokol

Protokol rutin (semalam, 14-16 jam) — cocok untuk sebagian besar biopsi dan reseksi kecil (hingga ketebalan 4 mm). Waktu reagen: etanol 70% (1 jam), etanol 80% (1 jam), etanol 95% (1 jam × 2), etanol 100% (1,5 jam × 2), xylene (1,5 jam × 2), parafin (2 jam × 2 dengan vakum).

Protokol spesimen besar (24 jam) — untuk spesimen berlemak, padat, atau >4 mm. Langkah dehidrasi lebih panjang (2 jam masing-masing), langkah xylene tambahan (total 6-8 jam), dan infiltrasi parafin diperpanjang (4 jam × 2). Jaringan berlemak memerlukan penjernihan diperpanjang karena lemak larut perlahan dalam xylene.

Protokol cepat (4-6 jam) — untuk biopsi mendesak kecil. Menggunakan suhu lebih tinggi (60°C), waktu lebih pendek, dan dehidran lebih kuat (isopropanol). Dapat menghasilkan blok lebih keras tetapi morfologi memadai.

Pemecahan Masalah Pemrosesan

Blok lunak atau lembek — dehidrasi tidak lengkap atau infiltrasi parafin tidak memadai. Proses ulang jaringan dengan melelehkan parafin dan mengulangi dari etanol 100%.

Blok rapuh — dehidrasi berlebihan, panas berlebihan, atau paparan xylene berkepanjangan. Kurangi waktu dehidrasi atau turunkan suhu oven. Tambahkan setetes agen pembasah ke penangas air selama pemotongan.

Penyusutan jaringan — pemrosesan normal menyebabkan penyusutan linier 10-15%. Penyusutan berlebihan akibat konsentrasi etanol tinggi yang diterapkan terlalu awal — pastikan dehidrasi bertingkat dimulai pada 70%.

Area putih, kapur di blok — penjernihan tidak lengkap (air atau etanol sisa). Proses ulang dari tahap penjernihan.

Kontrol Mutu

Pantau kualitas pemrosesan dengan memeriksa penampilan blok (parafin seragam, tembus cahaya tanpa bintik putih), kualitas pemotongan (pita halus tanpa chatter atau robekan), dan kualitas H&E (detail inti tajam tanpa pucat berlebihan). Kemurnian reagen diperiksa dengan berat jenis (etanol), indeks bias, atau proses pengujian jaringan. Perawatan rutin pemroses — membersihkan saluran reagen, mengganti segel, mengkalibrasi suhu dan vakum — mencegah kegagalan batch. Dokumentasikan semua perubahan reagen dan perawatan dalam log jaminan mutu.