Pewarnaan jaringan ikat adalah kelompok teknik histokimia yang membedakan komponen utama matriks ekstraseluler — kolagen, serat elastis, retikulin, dan membran basal — satu sama lain dan dari sel otot. Mereka penting untuk mengevaluasi fibrosis, patologi vaskular, dan reaksi stroma.
Masson’s Trichrome
Masson’s trichrome menggunakan tiga pewarna untuk mewarnai komponen jaringan yang berbeda. Weigert’s iron hematoxylin mewarnai inti hitam. Pewarna asam (Biebrich scarlet-acid fuchsin) mewarnai otot dan sitoplasma merah. Pewarna anionik (aniline blue atau methyl blue) mewarnai kolagen biru (atau hijau, dengan light green SF sebagai pewarna ketiga). Diferensiasi dalam asam fosfotungstat atau fosfomolibdat mengontrol berapa banyak pewarna merah yang dipertahankan — otot tetap merah, sementara kolagen dihilangkan warnanya dan mengambil counterstain biru.
Aplikasi meliputi penilaian fibrosis hati (stadium METAVIR, skor Ishak), fibrosis miokard setelah infark, penyakit otot (distrofi menunjukkan peningkatan kolagen endomisial), dan fibrosis ginjal (fibrosis interstisial dan atrofi tubulus). Pewarnaan ini juga menyoroti membran basal glomerulus dan membantu mengidentifikasi nekrosis fibrinoid pada pembuluh.
Verhoeff-van Gieson (VVG)
VVG mewarnai serat elastis hitam menggunakan pewarnaan elastis Verhoeff (hematoxylin, ferri klorida, dan yodium), diikuti counterstain van Gieson (acid fuchsin dan asam pikrat) yang mewarnai kolagen merah dan otot kuning. Serat elastis muncul sebagai serat hitam, bergelombang, bercabang dengan latar belakang merah-kuning. VVG digunakan untuk mengevaluasi gangguan serat elastis: sindrom Marfan (fragmentasi dan disrupsi serat elastis aorta), emfisema (kehilangan serat elastis alveolar), dan arteriosklerosis (duplikasi dan kalsifikasi lamina elastis). Dalam patologi vaskular, VVG menunjukkan lamina elastis internal dan eksternal, penting untuk mengidentifikasi invasi vaskular oleh tumor dan mengklasifikasikan lesi arteri.
Pewarnaan Retikulin
Pewarnaan retikulin (Gordon dan Sweet atau impregnasi perak Gomori) mendepositkan perak metalik pada serat retikulin (kolagen tipe III), yang tampak hitam dengan latar belakang pucat. Retikulin membentuk kerangka pendukung kelenjar, pembuluh darah, dan otot polos. Dalam patologi hati, pewarnaan retikulin menyoroti arsitektur lempeng hati — kehilangan kerangka retikulin normal mengindikasikan sirosis; ekspansi antara lempeng mengindikasikan nodul regeneratif. Dalam patologi sumsum tulang, pewarnaan retikulin menilai mielofibrosis (MF-0 hingga MF-3). Dalam patologi tumor, retikulin menguraikan struktur alveolar dan kelenjar, membantu mengklasifikasikan tumor berdiferensiasi buruk.
Phosphotungstic Acid Hematoxylin (PTAH)
PTAH mewarnai fibrin, lurik silang otot rangka, serat glial, dan inti. Lurik otot dan fibrin tampak biru; kolagen dan tulang rawan tampak coklat-merah muda. PTAH digunakan untuk mendiagnosis nekrosis fibrinoid (vaskulitis), rabdomiosarkoma (lurik silang), dan penyakit Alzheimer (kusut neurofibrilar dan plak senilis). Pewarnaan ini memerlukan oksidasi hati-hati (kalium permanganat) dan mordan dan secara teknis menuntut.
Imunohistokimia Aktin Otot Polos
Meskipun bukan pewarnaan histokimia, aktin otot polos (SMA) IHC sebagian besar telah menggantikan pewarnaan jaringan ikat tradisional untuk mengidentifikasi sel otot polos dan miofibroblas. SMA mewarnai otot polos vaskular, perisit, dan sel mioepitel. Ini digunakan untuk mengevaluasi diferensiasi tumor (leiomiosarkoma) dan proliferasi miofibroblastik.
Kontrol Mutu
Setiap pewarnaan jaringan ikat memerlukan kontrol positif yang diketahui mengandung komponen target: kulit atau usus besar untuk trichrome (kolagen), arteri atau paru untuk VVG (serat elastis), hati atau limpa untuk retikulin, dan otot atau gumpalan fibrin untuk PTAH. Kontrol dijalankan dengan setiap batch. Pewarnaan berlebih dan kurang dinilai dengan membandingkan intensitas kontrol dengan norma yang ditetapkan. Pemecahan masalah umum termasuk menyesuaikan waktu diferensiasi (trichrome), konsentrasi ferri klorida (VVG), atau suhu larutan perak (retikulin).
