Validasi metode adalah proses terdokumentasi untuk membuktikan bahwa metode analitis bekerja secara andal untuk aplikasi yang dimaksudkan. Badan regulasi seperti ICH, USP, FDA, dan ISO mewajibkan validasi untuk metode yang digunakan dalam pengujian pelepasan farmasi, diagnostik klinis, kepatuhan lingkungan, dan keamanan pangan. Validasi memastikan bahwa metode menghasilkan data yang dapat dipertahankan dan reprodusibel dalam kriteria penerimaan yang ditentukan.
Akurasi (kebenaran) mengukur seberapa dekat nilai terukur dengan nilai sebenarnya dan dinilai melalui eksperimen perolehan kembali spike, analisis bahan referensi bersertifikat (CRM), atau perbandingan dengan metode referensi. Presisi menggambarkan kedekatan pengukuran ulangan dan dinyatakan sebagai simpangan baku relatif (%RSD). Keterulangan (presisi dalam satu larian) diperoleh dengan menganalisis replikat dalam kondisi yang sama pada hari yang sama. Reprodusibilitas (presisi antar-laboratorium) menilai kinerja di berbagai laboratorium, analis, dan instrumen. Presisi antara menjembatani keduanya, dengan memvariasikan faktor seperti hari, analis, atau instrumen dalam satu laboratorium.
Spesifisitas (selektivitas) menunjukkan bahwa metode mengukur analit secara tak terbantahkan dengan adanya pengganggu — komponen matriks, produk degradasi, atau zat terkait. Untuk metode kromatografi, spesifisitas ditunjukkan oleh resolusi dasar semua puncak. Batas deteksi (LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ) menentukan kemampuan metode pada konsentrasi rendah. LOD adalah sinyal terkecil yang dapat dideteksi (biasanya S/N ≥ 3 atau 3,3σ/S), sedangkan LOQ adalah konsentrasi terendah yang dapat dikuantifikasi dengan akurasi dan presisi yang dapat diterima (S/N ≥ 10 atau 10σ/S).
Linearitas adalah kemampuan metode untuk menghasilkan hasil pengujian yang sebanding dengan konsentrasi analit dalam rentang tertentu, ditunjukkan oleh koefisien korelasi (r² ≥ 0,995 atau 0,999), intersep-y, dan analisis residual. Rentang adalah interval antara konsentrasi atas dan bawah di mana metode telah menunjukkan linearitas, akurasi, dan presisi yang dapat diterima. Ketangguhan mengukur ketahanan metode terhadap variasi yang disengaja dalam parameter seperti pH, suhu, laju alir, atau volume injeksi. Kekasaran (sekarang sering digabungkan ke dalam ketangguhan) secara historis mengacu pada reprodusibilitas dalam kondisi operasional yang berbeda.
Uji kesesuaian sistem (SST) dilakukan sebelum dan selama setiap larian analitis untuk memverifikasi bahwa instrumen dan metode bekerja secara memadai. Parameter SST meliputi resolusi, faktor ekor, lempeng teoretis, dan presisi injeksi ulangan. Protokol validasi formal menentukan eksperimen, kriteria penerimaan, dan metode statistik di muka. Laporan validasi akhir mendokumentasikan semua hasil, penyimpangan, dan pernyataan tentang ruang lingkup serta keterbatasan metode yang dimaksudkan. Metode yang divalidasi penuh menyediakan fondasi untuk data analitis yang andal di semua industri yang diatur.
