肌肉和神经活检是神经肌肉疾病的重要诊断工具。与常规手术病理标本不同，它们需要专门处理——新鲜组织必须立即处理用于冰冻切片和酶组织化学，并且必须准备平行样本用于石蜡包埋和电子显微镜。

肌肉活检：适应症和选择

肌肉活检的适应症包括：不明原因的无力（近端>远端）、肌酸激酶（CK）升高、肌源性或神经源性EMG表现、疑似炎症性肌病（皮肌炎、多发性肌炎、包涵体肌炎）、疑似肌营养不良症、疑似代谢性肌病（线粒体、糖原贮积、脂质贮积）和先天性肌病。

活检部位根据临床受累和EMG发现选择。股外侧肌（股四头肌）是最常见的部位——易于接近，代表近端肌肉，且正常值已有明确记录。三角肌用于上肢近端无力。肱二头肌是替代选择。活检应从中度受累的肌肉中取——终末期肌肉（严重萎缩、脂肪替代）提供的诊断信息很少。该部位近期不应进行过EMG针刺（针创伤引起的伪影）。

肌肉活检处理方案

标本新鲜接收，用生理盐水湿润的纱布保持湿润。在解剖显微镜下，将肌纤维纵向定向。标本分为：冰冻切片（最大部分，5-8 mm × 5 mm）——安装在OCT化合物中的软木盘上，定向用于横切，并在液氮中冷却至-160°C的异戊烷中速冻。石蜡（3-5 mm块）——福尔马林固定用于常规组织学和IHC。电子显微镜（1-2 mm块，纵向定向）——固定在2.5%戊二醛中。生化检测（可选，10-20 mg）——速冻用于酶分析或遗传检测。

冰冻块在-25°C的低温恒温器上以8-10 µm切片。标准冰冻切片 panel包括：H&E、改良Gomori三色、pH 9.4、4.6和4.3的ATP酶、NADH-TR、COX、SDH、酸性磷酸酶、Oil Red O（中性脂质）、PAS（糖原）和非特异性酯酶。

冰冻切片酶组织化学

不同pH水平的ATP酶反应必须在未固定的冰冻切片上进行，因为固定会灭活肌球蛋白ATP酶。反应为：pH 4.3预孵育（I型深色，II型浅色）、pH 4.6（I型深色，IIA浅色，IIB中等）和pH 9.4（I型浅色，II型深色）。这些可区分I型（慢肌、氧化型）和II型（快肌、糖酵解型）纤维及其亚型。正常分布为棋盘格模式，姿势肌以I型为主，相位肌以II型为主。

NADH-TR、COX和SDH必须在切片后24-48小时内在冰冻切片上进行——酶活性随储存而下降。阳性对照（已知正常肌肉）随每批运行。

石蜡切片与IHC

福尔马林固定、石蜡包埋的肌肉以4-5 µm切片，并用H&E、LFB-PAS和刚果红染色。Dystrophin（杆状域、N端、C端和缺失对照）的IHC可诊断杜氏/贝氏肌营养不良症。Sarcoglycans（α、β、γ、δ）——突变导致肢带型肌营养不良症。Dysferlin——突变导致Miyoshi肌病和LGMD2B。MHC I类IHC——在炎症性肌病（皮肌炎、多发性肌炎）中上调。MxA IHC——在皮肌炎中被I型干扰素上调（束周模式）。

神经活检

腓肠神经活检是最常见的神经活检——腓肠神经是纯感觉神经，其切除仅导致足外侧轻微的感觉 loss。适应症包括：疑似血管炎性神经病、遗传性神经病（Charcot-Marie-Tooth病）、淀粉样神经病、炎症性神经病（结节病、CIDP）和贮积症。

标本（2-3 cm）处理为：石蜡——H&E、LFB-PAS、刚果红、IHC（神经丝、MBP、CD68、CD3、CD20）。冰冻——ATP酶（用于纤维类型）、NADH-TR、酸性磷酸酶。单纤维制备——分离并 mounting 30-50根单纤维，用于评估轴突变性（髓鞘卵圆体）和节段性脱髓鞘（薄或缺失的髓鞘）。电子显微镜——量化有髓纤维密度、无髓纤维丢失，并识别特定异常（遗传性压力易感性神经病中的腊肠样结构、脱髓鞘神经病中的洋葱球、轴突萎缩）。

质量控制

所有神经肌肉活检技术都需要严格的质量控制。冰冻切片必须评估冷冻伪影（冰晶空泡化——提示冷冻速度慢；冷冻时组织应透明）。酶组织化学反应必须在阳性对照上显示预期的纤维类型模式。Dystrophin的IHC需要已知的正常和dystrophin缺陷对照。进行这些专业技术的实验室建议参与神经肌肉EQA项目。