Biopsi otot dan saraf adalah alat diagnostik penting untuk penyakit neuromuskular. Tidak seperti spesimen patologi bedah rutin, mereka memerlukan penanganan khusus — jaringan segar harus diproses segera untuk irisan beku dan histokimia enzim, dan sampel paralel harus disiapkan untuk embedding parafin dan mikroskop elektron.
Biopsi Otot: Indikasi dan Seleksi
Biopsi otot diindikasikan untuk: kelemahan yang tidak dapat dijelaskan (proksimal > distal), peningkatan creatine kinase (CK), temuan EMG miopatik atau neurogenik, dugaan miopati inflamasi (dermatomiositis, polimiositis, myositis badan inklusi), dugaan distrofi otot, dugaan miopati metabolik (mitokondria, penyimpanan glikogen, penyimpanan lipid), dan miopati kongenital.
Lokasi biopsi dipilih berdasarkan keterlibatan klinis dan temuan EMG. Vastus lateralis (quadriceps) adalah lokasi paling umum — mudah diakses, representatif dari otot proksimal, dan dikarakterisasi dengan baik untuk nilai normal. Deltoid digunakan untuk kelemahan ekstremitas atas proksimal. Biceps brachii adalah alternatif. Biopsi harus diambil dari otot yang terkena sedang — otot stadium akhir (atrofi berat, penggantian lemak) memberikan sedikit informasi diagnostik. Lokasi tidak boleh baru menjalani jarum EMG (artefak dari trauma jarum).
Protokol Pemrosesan Biopsi Otot
Spesimen diterima segar, dijaga tetap lembab dengan kain kasa yang dibasahi saline. Di bawah mikroskop diseksi, serat otot diorientasikan secara longitudinal. Spesimen dibagi: irisan beku (bagian terbesar, 5-8 mm × 5 mm) — dipasang pada cakram gabus dalam senyawa OCT, diorientasikan untuk pemotongan melintang, dan dibekukan cepat dalam isopentana yang didinginkan hingga -160°C dalam nitrogen cair. Parafin (potongan 3-5 mm) — difiksasi dalam formalin untuk histologi rutin dan IHC. Mikroskop elektron (potongan 1-2 mm, diorientasikan longitudinal) — difiksasi dalam 2,5% glutaraldehida. Biokimia (opsional, 10-20 mg) — dibekukan cepat untuk analisis enzim atau pengujian genetik.
Blok beku dipotong pada 8-10 µm dalam kriostat pada -25°C. Panel irisan beku standar meliputi: H&E, Gomori trichrome modifikasi, ATPase pada pH 9,4, 4,6, dan 4,3, NADH-TR, COX, SDH, asam fosfatase, Oil Red O (lipid netral), PAS (glikogen), dan esterase non-spesifik.
Histokimia Enzim Irisan Beku
Reaksi ATPase pada tingkat pH yang berbeda harus dilakukan pada irisan beku tanpa fiksasi karena fiksasi menginaktivasi miosin ATPase. Reaksinya adalah: pra-inkubasi pada pH 4,3 (tipe I gelap, tipe II terang), pH 4,6 (tipe I gelap, IIA terang, IIB intermediate), dan pH 9,4 (tipe I terang, tipe II gelap). Ini membedakan serat tipe I (kedutan lambat, oksidatif) dan tipe II (kedutan cepat, glikolitik) dan subtipe mereka. Distribusi normal adalah pola papan catur dengan predominansi tipe I pada otot postural dan predominansi tipe II pada otot fasik.
NADH-TR, COX, dan SDH harus dilakukan pada irisan beku dalam 24-48 jam setelah pemotongan — aktivitas enzim menurun dengan penyimpanan. Kontrol positif (otot normal yang diketahui) dijalankan dengan setiap batch.
Irisan Parafin dan IHC
Otot tetap formalin dan embedded parafin dipotong pada 4-5 µm dan diwarnai dengan H&E, LFB-PAS, dan Congo Red. IHC untuk distrofin (domain rod, N-terminus, C-terminus, dan kontrol dropout) mendiagnosis distrofi otot Duchenne/Becker. Sarkoglikan (alfa, beta, gamma, delta) — mutasi menyebabkan distrofi otot girdle limb. Disferlin — mutasi menyebabkan miopati Miyoshi dan LGMD2B. IHC MHC kelas I — diregulasi pada miopati inflamasi (dermatomiositis, polimiositis). IHC MxA — diregulasi oleh interferon tipe I pada dermatomiositis (pola perifasikular).
Biopsi Saraf
Biopsi saraf sural adalah biopsi saraf paling umum — saraf sural adalah saraf sensorik murni, dan pengangkatannya hanya menyebabkan kehilangan sensorik minor di atas kaki lateral. Indikasi meliputi: dugaan neuropati vaskulitik, neuropati herediter (penyakit Charcot-Marie-Tooth), neuropati amiloid, neuropati inflamasi (sarcoid, CIDP), dan penyakit penyimpanan.
Spesimen (2-3 cm) diproses untuk: parafin — H&E, LFB-PAS, Congo Red, IHC (neurofilamen, MBP, CD68, CD3, CD20). Beku — ATPase (untuk tipe serat), NADH-TR, asam fosfatase. Serat terurai — 30-50 serat individu dipisahkan dan dipasang untuk menilai degenerasi aksonal (ovoid mielin) dan demielinasi segmental (selubung mielin tipis atau tidak ada). Mikroskop elektron — mengkuantifikasi densitas serat bermielin, kehilangan serat tidak bermielin, dan mengidentifikasi abnormalitas spesifik (tomakula pada neuropati herediter dengan palsi tekanan, bawang bombay pada neuropati demielinasi, atrofi aksonal).
Kontrol Mutu
Semua teknik biopsi neuromuskular memerlukan kontrol mutu yang ketat. Irisan beku harus dievaluasi untuk artefak beku (vakuolasi kristal es — mengindikasikan pembekuan lambat; jaringan harus transparan saat dibekukan). Reaksi histokimia enzim harus menunjukkan pola tipe serat yang diharapkan pada kontrol positif. IHC untuk distrofin memerlukan kontrol normal dan defisien distrofin yang diketahui. Partisipasi dalam program EQA neuromuskular direkomendasikan untuk laboratorium yang melakukan teknik khusus ini.
