La purificación de plásmidos, también conocida como miniprep, es una técnica utilizada para aislar pequeñas moléculas circulares de ADN (plásmidos) de células bacterianas. Los plásmidos se utilizan comúnmente como vectores en clonación molecular, y purificarlos es esencial para secuenciación, transfección y manipulación adicional.
Cómo funciona la purificación de plásmidos
- Cultivo bacteriano
Una sola colonia bacteriana que contiene el plásmido deseado se cultiva durante la noche en medio líquido con el antibiótico apropiado. Esto asegura que las bacterias mantengan el plásmido y produzcan suficiente para la extracción.
- Cosecha y lisis celular
El cultivo bacteriano se centrifuga para sedimentar las células. El sedimento se resuspende en un tampón que contiene RNasa (para digerir ARN) y luego se trata con una solución de lisis alcalina que contiene SDS e hidróxido de sodio. Esto rompe las células y desnaturaliza el ADN.
- Neutralización
Se añade un tampón de neutralización que contiene acetato de potasio. La alta concentración de sal hace que el ADN cromosómico desnaturalizado y las proteínas precipiten, mientras que el ADN plasmídico más pequeño y superenrollado permanece en solución. La mezcla se centrifuga y el sobrenadante que contiene el plásmido se recolecta.
- Unión y lavado
El sobrenadante se pasa a través de una columna de membrana de sílice en condiciones que hacen que el ADN plasmídico se una. Un tampón de lavado elimina los contaminantes restantes como sales, proteínas y ARN.
- Elución
El ADN plasmídico purificado se libera de la membrana utilizando un tampón de baja salinidad o agua. El ADN resultante es lo suficientemente puro para secuenciación, digestión con enzimas de restricción o transfección de células eucariotas.
