A citologia em base líquida (CBL) substituiu amplamente a preparação convencional de esfregaço para citologia cervical e é cada vez mais adotada para espécimes não ginecológicos. Ao coletar células em um preservativo líquido, a CBL permite qualidade consistente da lâmina, material de fundo reduzido e — criticamente — testes moleculares de reflexo a partir da amostra residual.
Plataformas de CBL
ThinPrep (Hologic) — o dispositivo de coleta é enxaguado em solução PreservCyt (à base de metanol). O processador dispersa as células, coleta-as em um filtro de policarbonato e as transfere para uma lâmina em um círculo de 20 mm de diâmetro. A monocamada padronizada reduz a sobreposição celular e sangue ou inflamação obscurecedores.
SurePath (BD) — o dispositivo de coleta é enxaguado em solução CytoRich. O processador usa centrifugação por gradiente de densidade para separar células diagnósticas de sangue, muco e detritos antes de depositar as células em um círculo de 13 mm. O SurePath produz lâminas mais limpas para espécimes hemorrágicos.
Vantagens da CBL
Taxa reduzida de insatisfatórios — a CBL diminui os exames de Pap insatisfatórios de 5-15% para 1-3% filtrando sangue, inflamação e grupos celulares espessos. Sensibilidade melhorada — meta-análises mostram que a CBL tem sensibilidade equivalente ou ligeiramente maior para HSIL+ em comparação com esfregaços convencionais. Amostra residual — o fluido PreservCyt ou CytoRich restante (tipicamente 10-20 mL) está disponível para teste de HPV, teste de Clamídia/Gonorreia e análise de biomarcadores moleculares. Múltiplas lâminas — lâminas adicionais podem ser preparadas do mesmo frasco para colorações especiais ou IHQ.
CBL em Citologia Não Ginecológica
A CBL é cada vez mais usada para fluidos corporais, urina, espécimes de PAAF e amostras respiratórias. As vantagens incluem preparação concentrada de células, remoção de sangue obscurecedor e fundo consistente. As desvantagens incluem perda de pistas arquiteturais (agrupamentos tridimensionais podem ser dispersos) e alterações na morfologia celular (células parecem menores, cromatina menos nítida que em esfregaços convencionais). Os laboratórios devem validar a CBL contra preparações convencionais para cada tipo de espécime não ginecológico.
Teste de HPV a partir de CBL
Amostras cervicais de CBL são o espécime primário para teste de HR-HPV. Métodos de amplificação de sinal (Hybrid Capture 2, Cervista) detectam DNA de HPV de um pool de 13-14 tipos de alto risco sem genotipagem. Métodos de amplificação de alvo (baseados em PCR: Cobas 4800, Aptima) detectam e genotipam HPV 16 e 18 separadamente de outros tipos HR. O Cobas 4800 é aprovado pelo FDA para rastreamento primário de HPV e co-teste. O Aptima detecta mRNA de E6/E7, indicando infecção transcricionalmente ativa em vez de DNA de HPV transitório. O teste de HPV a partir de CBL tem sensibilidade e especificidade equivalentes ao teste de espécimes cervicais coletados separadamente.
Testes Moleculares a partir de Amostras Citológicas
FISH (hibridização in situ por fluorescência) em espécimes citológicos detecta anormalidades cromossômicas. A FISH UroVysion (cromossomos 3, 7, 17 e 9p21) aumenta a sensibilidade para carcinoma uroterial em citologia urinária. A FISH de break-apart ALK em blocos celulares de PAAF pulmonar identifica adenocarcinoma rearranjado para ALK.
Testes baseados em PCR em amostras citológicas detectam mutações (EGFR, KRAS, BRAF), DNA viral (HPV, EBV, CMV) e clonalidade (rearranjos de IgH e TCR para linfoma). O DNA de lâminas citológicas ou blocos celulares é adequado para a maioria das aplicações de PCR. A sensibilidade é comparável à de amostras histológicas.
Sequenciamento de próxima geração (NGS) — blocos celulares de espécimes de PAAF e efusão fornecem DNA suficiente para painéis de NGS direcionados (50-500 genes). O perfil genômico abrangente a partir de amostras citológicas orienta a seleção de terapia alvo. As taxas de sucesso (DNA adequado para NGS) excedem 90% quando os blocos celulares contêm pelo menos 20% de celularidade tumoral.
Qualidade e Validação
Testes moleculares em espécimes citológicos requerem validação contra histologia ou status mutacional conhecido. As variáveis pré-analíticas incluem tipo de fixativo (PreservCyt à base de metanol vs. etanol), tempo e temperatura de armazenamento e concentração celular. Os laboratórios devem estabelecer requisitos mínimos de celularidade e documentar a adequação da amostra para testes moleculares. Programas de garantia de qualidade incluem testes de proficiência para ensaios moleculares em material citológico.
Direções Futuras
Citologia digital — a imageamento de lâmina inteira de lâminas de CBL permite revisão remota, triagem assistida por computador e detecção baseada em inteligência artificial de células anormais. Painéis multiplex de biomarcadores — análise de proteínas (IHQ) e ácidos nucleicos (FISH, mutação) do mesmo bloco celular fornece diagnóstico integrado e seleção de terapia. Células tumorais circulantes (CTCs) e biópsia líquida (DNA livre de células do sangue) estão estendendo a citologia além da amostragem de tecido sólido para detecção e monitoramento não invasivos de câncer. Essas tecnologias complementam em vez de substituir a citomorfologia tradicional, e sua interpretação requer integração com contexto clínico e de imagem.
