La citología en base líquida (CBL) ha reemplazado en gran medida la preparación de frotis convencional para citología cervical y se adopta cada vez más para especímenes no ginecológicos. Al recolectar células en un preservante líquido, la CBL permite una calidad de portaobjetos consistente, reducción de material que oscurece y, críticamente, pruebas moleculares reflejas a partir de la muestra residual.
Plataformas de CBL
ThinPrep (Hologic) — el dispositivo de recolección se enjuaga en solución PreservCyt (base metanol). El procesador dispersa las células, las recolecta en un filtro de policarbonato y las transfiere a un portaobjetos en un círculo de 20 mm de diámetro. La monocapa estandarizada reduce la superposición celular y la sangre o inflamación que oscurecen.
SurePath (BD) — el dispositivo de recolección se enjuaga en solución CytoRich. El procesador utiliza centrifugación por gradiente de densidad para separar las células diagnósticas de sangre, moco y detritos antes de depositar las células en un círculo de 13 mm. SurePath produce portaobjetos más limpios para muestras sanguinolentas.
Ventajas de la CBL
Tasa de insatisfactorios reducida — la CBL disminuye las pruebas de Pap insatisfactorias del 5-15% al 1-3% filtrando sangre, inflamación y grupos celulares gruesos que oscurecen. Sensibilidad mejorada — los metaanálisis muestran que la CBL tiene sensibilidad equivalente o ligeramente mayor para HSIL+ en comparación con los frotis convencionales. Muestra residual — el fluido PreservCyt o CytoRich restante (típicamente 10-20 mL) está disponible para pruebas de VPH, pruebas de clamidia/gonorrea y análisis de biomarcadores moleculares. Múltiples portaobjetos — se pueden preparar portaobjetos adicionales del mismo vial para tinciones especiales o IHQ.
CBL en Citología No Ginecológica
La CBL se usa cada vez más para líquidos corporales, orina, muestras de CAAF y muestras respiratorias. Las ventajas incluyen preparación celular concentrada, eliminación de sangre que oscurece y fondo consistente. Las desventajas incluyen pérdida de pistas arquitectónicas (los grupos tridimensionales pueden dispersarse) y cambios en la morfología celular (las células aparecen más pequeñas, la cromatina menos nítida que en los frotis convencionales). Los laboratorios deben validar la CBL frente a las preparaciones convencionales para cada tipo de espécimen no ginecológico.
Pruebas de VPH a partir de CBL
Las muestras cervicales de CBL son el espécimen principal para las pruebas de VPH-AR. Los métodos de amplificación de señal (Hybrid Capture 2, Cervista) detectan ADN de VPH de un grupo de 13-14 tipos de alto riesgo sin genotipificación. Los métodos de amplificación diana (basados en PCR: Cobas 4800, Aptima) detectan y genotipifican VPH 16 y 18 por separado de otros tipos de AR. Cobas 4800 está aprobado por la FDA para cribado primario de VPH y cotestación. Aptima detecta ARNm de E6/E7, indicando infección transcripcionalmente activa en lugar de ADN de VPH transitorio. Las pruebas de VPH a partir de CBL tienen sensibilidad y especificidad equivalentes a las pruebas de especímenes cervicales recolectados por separado.
Pruebas Moleculares a partir de Muestras Citológicas
FISH (hibridación in situ por fluorescencia) en muestras citológicas detecta anomalías cromosómicas. UroVysion FISH (cromosomas 3, 7, 17 y 9p21) aumenta la sensibilidad para carcinoma urotelial en citología de orina. ALK break-apart FISH en bloques celulares de CAAF pulmonar identifica adenocarcinoma reordenado por ALK.
Pruebas basadas en PCR en muestras citológicas detectan mutaciones (EGFR, KRAS, BRAF), ADN viral (VPH, EBV, CMV) y clonalidad (reordenamientos de genes IgH y TCR para linfoma). El ADN de portaobjetos de citología o bloques celulares es adecuado para la mayoría de las aplicaciones de PCR. La sensibilidad es comparable a la de muestras histológicas.
Secuenciación de próxima generación (NGS) — los bloques celulares de CAAF y especímenes de derrame proporcionan suficiente ADN para paneles de NGS dirigidos (50-500 genes). El perfil genómico integral a partir de muestras citológicas guía la selección de terapia dirigida. Las tasas de éxito (ADN adecuado para NGS) superan el 90% cuando los bloques celulares contienen al menos un 20% de celularidad tumoral.
Calidad y Validación
Las pruebas moleculares en especímenes citológicos requieren validación frente a histología o estado mutacional conocido. Las variables preanalíticas incluyen el tipo de fijador (PreservCyt base metanol vs. etanol), tiempo y temperatura de almacenamiento y concentración celular. Los laboratorios deben establecer requisitos mínimos de celularidad y documentar la adecuación de la muestra para pruebas moleculares. Los programas de aseguramiento de la calidad incluyen pruebas de competencia para ensayos moleculares en material citológico.
Direcciones Futuras
Citología digital — la imagen de portaobjetos completo de portaobjetos de CBL permite revisión remota, cribado asistido por computadora y detección basada en inteligencia artificial de células anormales. Paneles de biomarcadores múltiplex — análisis de proteínas (IHQ) y ácidos nucleicos (FISH, mutaciones) del mismo bloque celular proporciona diagnóstico integrado y selección de terapia. Células tumorales circulantes (CTC) y biopsia líquida (ADN libre de células de la sangre) están extendiendo la citología más allá del muestreo de tejido sólido hacia la detección y monitoreo no invasivos del cáncer. Estas tecnologías complementan, en lugar de reemplazar, la citomorfología tradicional, y su interpretación requiere integración con el contexto clínico y de imagen.
