体积排阻色谱法（SEC），也称为有机聚合物的凝胶渗透色谱法（GPC）或水相体系的凝胶过滤色谱法（GFC），根据分子的流体动力学体积而非与固定相的化学相互作用进行分离。引入色谱柱的样品由流动相携带着通过多孔微球床。大于最大孔径（超过排阻极限）的分子无法进入孔隙，最先洗脱。小到足以穿透整个孔网络的分子（低于渗透极限）最后洗脱。在这两个极限之间，分子按尺寸递减顺序洗脱。

固定相由交联聚合物微球组成，具有可控的孔径分布。常见材料包括用于有机SEC的聚苯乙烯-二乙烯苯，以及用于水相SEC的葡聚糖（Sephadex）、琼脂糖（Sepharose）和聚丙烯酰胺。根据分析物的分子量范围选择孔径；不同孔径的色谱柱可以串联连接以扩展分离范围。颗粒尺寸影响分离度和背压，较小的颗粒（3-5 µm）提供更高的效率。

分子量校准使用已知分子量的窄分布聚合物标准品，通常根据样品类型选择聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或聚乙二醇。校准曲线绘制log(Mw)与洗脱体积的关系图。从色谱图计算平均分子量：数均分子量（Mn）、重均分子量（Mw）和峰位分子量（Mp）。**多分散性指数（PDI = Mw/Mn）**指示分子量分布的宽度，单分散样品的PDI = 1。

SEC的应用集中在聚合物表征，包括分子量分布测定、聚合动力学监测和共聚物组成分析。SEC还用于生物化学中的蛋白质纯化和脱盐（缓冲液置换）、食品工业中的多糖和蛋白质分析，以及石油化工分析中的重馏分表征。水相SEC（GFC）广泛用于在非变性条件下分析水溶性聚合物、蛋白质和核酸。

在方法开发中必须考虑SEC的局限性。非排阻效应如静电相互作用（带电固定相上的离子排阻或离子包含）和疏水吸附可能扭曲洗脱曲线。样品浓度必须保持较低（通常< 2 mg/mL），以避免粘性指进和过载效应。色谱柱选择至关重要：孔径必须与样品的分子量范围匹配，流速必须适中（0.5-1.0 mL/min），以最小化高分子量聚合物的剪切降解。