苏木精和伊红（H&E）是组织病理学中使用最广泛的染色，应用于几乎每张诊断性组织切片。理解其化学原理、配方变异和常见问题对于持续生产高质量的诊断玻片至关重要。

苏木精化学原理

苏木精是一种天然染料，从苏木（Haematoxylon campechianum）的心材中提取。它本身不是染料——必须氧化为氧化苏木精（hematein），即活性着色剂。氧化通过暴露于空气和光自然发生（成熟）或使用化学氧化剂（碘酸钠、氧化汞）人工进行。氧化苏木精与金属媒染剂（铝、铁、钨）结合形成有色漆复合物，与组织成分结合。

明矾苏木精（Harris、Gill、Mayer、Gill II）使用铝盐作为媒染剂，将细胞核染成蓝色。Harris苏木精使用氧化汞作为氧化剂并且需要成熟；它产生清晰的核细节，但使用前需要过滤以去除沉淀的汞。Gill苏木精使用碘酸钠作为化学氧化剂，无需成熟即可使用——更稳定且结果一致。Mayer苏木精类似但更稀释，需要更长的染色时间。

伊红化学原理

伊红是一种呫吨染料，有两种形式：伊红Y（偏黄，最常见）和伊红B（偏蓝）。伊红Y可溶于水，用于水溶液或酒精溶液。它是一种酸性染料，结合碱性（阳离子）组织成分——胞质蛋白、胶原、红细胞和分泌颗粒。伊红溶液通常含有乙酸以增强红细胞染色并防止胶原过染。

H&E染色方案

自动H&E染色机将玻片通过序贯浴槽：脱蜡（二甲苯，3次更换）、水化（梯度乙醇100%至70%，然后水）、苏木精（3-8分钟，取决于配方和所需强度）、蓝化（Scott自来水或氨水，在碱性pH下将苏木精从红色变为蓝色）、伊红（1-3分钟）、脱水（梯度乙醇70%至100%）、透明（二甲苯）和封片（永久封片剂）。自动染色机上的总周期时间约为30-45分钟。

H&E故障排除

浅或弱核染色——苏木精可能已耗尽（更换）、媒染剂浓度可能低或染色时间不足。检查苏木精是否已氧化超过其使用寿命（过熟的苏木精变成深棕色且染色不佳）。骨标本的过度脱钙也会降低核嗜碱性。

浑浊或过染的核——苏木精染色时间过长、蓝化步骤不足或苏木精溶液过浓。区分于切片厚度过厚（切片应为3-5 µm）。

伊红压倒苏木精——伊红浓度过高、伊红pH过酸或苏木精过弱。减少伊红时间或增加苏木精时间。切片上伊红强度不一提示组织处理不均匀。

过多蓝色调——在酸性酒精（1% HCl in 70%乙醇）中分化不足，或伊红时间不足。检查酸性酒精是否已耗尽。

核和胞质染色均弱——切片厚度过薄（小于3 µm）、组织在福尔马林中过度固定或脱蜡不足（二甲苯带入水性苏木精中）。

质量控制

H&E的每日QC包括对照玻片（具有已知核和胞质细节的组织——扁桃体或结肠）、评估核/胞质对比度、整张玻片的均匀性、无沉淀物以及正确封片无气泡。记录QC结果和纠正措施。H&E溶液应按计划更换（苏木精每1-2周或500-1000张玻片后；伊红每1-2周）。染色设备的定期维护——清洁 racks、检查液位、校准计时器——可防止批次失败。