染色为半透明的组织切片提供对比度,使细胞和细胞外成分能够在明视野显微镜下区分。组织病理学中的标准染色是苏木精和伊红(H&E),但有数十种特殊染色可用于突出显示特定结构、微生物和化学物质。
苏木精和伊红(H&E)
H&E是组织病理学的主力染色,几乎用于所有常规处理的切片。苏木精是一种碱性染料,结合酸性结构(细胞核、核糖体、粗面内质网)并将其染成蓝紫色(嗜碱性)。伊红是一种酸性染料,结合碱性结构(胞质蛋白、胶原、红细胞)并将其染成粉红色(嗜酸性)。
染色良好的H&E切片显示清晰的核细节,具有开放或浓缩的染色质、可见的核仁和清晰的核膜。胞质应显示适当的着色性质——胰腺腺泡细胞由于酶原颗粒而呈颗粒状,肌细胞呈嗜酸性和纤维状,软骨基质呈玻璃样和嗜碱性。过染(浑浊的核)、欠染(苍白的核)或不均匀染色等伪影表明染色过程存在问题或组织处理不良。
结缔组织特殊染色
Masson三色将胶原染成蓝色或绿色,肌肉和胞质染成红色,细胞核染成黑色。用于评估肝病中的纤维化、肌营养不良症和心肌瘢痕形成。
**Verhoeff-van Gieson(VVG)**将弹性纤维染成黑色,胶原染成红色,肌肉染成黄色。对评估血管疾病和弹性纤维疾病至关重要。
网状纤维染色(银浸渍)将III型胶原(网状纤维)染成黑色。它突出显示器官的结构框架,对诊断骨髓疾病和肝病至关重要。
**过碘酸-Schiff(PAS)**将糖原、糖蛋白和真菌细胞壁染成品红色。用于识别真菌、诊断糖原贮积症以及突出显示肾活检中的基底膜。PAS加淀粉酶(PAS-D)消化可区分糖原(被淀粉酶去除)和其他PAS阳性物质。
微生物染色
革兰染色(组织改良)区分组织切片中的革兰阳性(紫色)和革兰阴性(粉色)细菌。与微生物学中使用的细菌革兰染色技术不同,组织革兰染色适用于石蜡切片。
Ziehl-Neelsen将抗酸杆菌(结核分枝杆菌)染成亮红色,背景为蓝色或绿色复染。
**Grocott六胺银(GMS)**将真菌细胞壁染成黑色,是检测组织中真菌最敏感的染色。
Warthin-Starry将螺旋体和幽门螺杆菌染成黑色,背景为浅黄色。
胞质颗粒和包涵体染色
Giemsa染色用于骨髓环钻活检以评估造血细胞,并可检测幽门螺杆菌、肥大细胞和某些寄生虫。
**Luxol Fast Blue(LFB)**将髓鞘染成蓝绿色,用于神经病理学评估脱髓鞘疾病。
刚果红在明视野下将淀粉样蛋白沉积物染成鲑鱼粉色,在偏振光下显示苹果绿色双折射——淀粉样变性的诊断标准。
组织化学和酶组织化学
组织化学使用化学反应定位组织切片中的特定物质。Perls普鲁士蓝将三价铁(含铁血黄素)检测为蓝色沉淀——用于诊断铁过载疾病。Von Kossa染色检测软组织中的钙沉积物(黑色或棕色)。Oil Red O(冰冻切片)将中性脂质染成橙红色。
酶组织化学在原位检测酶活性。例子包括碱性磷酸酶(骨和肝脏)、酸性磷酸酶(前列腺)和非特异性酯酶(巨噬细胞)。这些技术需要新鲜或冷冻组织,因为固定会灭活酶。
免疫组织化学
免疫组织化学(IHC)使用与酶(辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶)偶联的抗体来检测组织切片中的特定抗原。反应用DAB(棕色)或Fast Red(红色)等色原可视化。由于其卓越的特异性,IHC已基本取代了许多特殊染色和酶组织化学技术。它在肿瘤分类(角蛋白、CD标志物)、感染性疾病诊断和预测性生物标志物检测(HER2、PD-L1、错配修复蛋白)中不可或缺。