Ikhtisar

Metabolomik LC-MS menggabungkan kekuatan pemisahan kromatografi cair dengan spesifisitas deteksi spektrometri massa untuk profil metabolit dalam sampel biologis kompleks. Kromatografi cair memisahkan metabolit berdasarkan sifat fisikokimianya, biasanya hidrofobisitas dalam fase terbalik atau polaritas dalam kromatografi cair interaksi hidrofilik (HILIC), sebelum memasuki spektrometer massa. Pemisahan dua dimensi ini (waktu retensi ditambah m/z) memungkinkan deteksi ribuan fitur metabolit dalam sekali proses. Metabolomik LC-MS telah menjadi platform dominan untuk profil metabolik yang tidak ditargetkan karena cakupan luas dari beragam metabolit kimia.

Metode

LC fase terbalik memisahkan metabolit non-polar hingga cukup polar menggunakan kolom C18 dengan gradien berair-organik, sehingga ideal untuk lipid, asam amino, dan asam organik kecil. HILIC mempertahankan metabolit polar seperti gula, nukleotida, dan fosfat organik yang sulit ditahan pada kolom fase terbalik. Spektrometri massa resolusi tinggi: menggunakan instrumen quadrupole-Orbitrap atau quadrupole-time-of-flight (QTOF), memberikan pengukuran massa yang akurat dalam 1-5 ppm, sehingga memungkinkan penetapan rumus molekul dengan percaya diri. Akuisisi data dilakukan dalam mode pemindaian penuh untuk pembuatan profil yang tidak ditargetkan atau dalam mode yang ditargetkan seperti pemantauan reaksi paralel untuk pengujian kuantitatif.

Aplikasi

Metabolomik LC-MS digunakan dalam penelitian klinis untuk mengidentifikasi biomarker metabolit untuk penyakit termasuk kanker, diabetes, dan gangguan neurodegeneratif. Dalam pengembangan obat, ini mengukur respons metabolik terhadap intervensi farmakologis. Metabolomik lingkungan menerapkan LC-MS untuk menilai respons organisme terhadap polutan dan pemicu stres. Teknik ini mengintegrasikan prinsip pemisahan HPLC dengan deteksi spektrometri massa dan mengikuti teknik persiapan sampel yang sangat penting untuk menjaga integritas dan reproduktifitas metabolit.