Penanganan cairan yang akurat adalah operasi manual yang paling sering dilakukan di laboratorium manapun. Kesalahan pada tahap ini akan merambat ke setiap langkah berikutnya, menjadikan teknik pipet dan persiapan larutan sangat penting untuk reprodusibilitas.
Prinsip Pipet
Pipet pemindah udara bekerja dengan menciptakan bantalan udara antara piston dan cairan. Volume diatur secara mekanis atau digital, dan piston memindahkan volume udara yang sesuai untuk menyedot atau mengeluarkan cairan.
Untuk pipet yang akurat, pegang pipet secara vertikal selama penyedotan. Celupkan ujung tip 2–4 mm di bawah meniskus untuk volume mikroliter, lebih dalam untuk volume yang lebih besar. Tekan plunger ke hentian pertama, tarik cairan secara perlahan dan mulus, lalu tarik tip sepanjang dinding wadah. Keluarkan dengan menekan ke hentian pertama, jeda, lalu tekan ke hentian kedua untuk mengeluarkan sisa cairan.
Kesalahan Pipet Umum
- Pembasahan awal: menyedot dan mengeluarkan cairan 2–3 kali sebelum pemindahan sebenarnya melembabkan bantalan udara dan mengurangi kehilangan akibat penguapan.
- Efek suhu: bantalan udara mengembang atau menyusut sesuai suhu. Baik pipet maupun cairan harus berada pada suhu ruang.
- Cairan kental: reverse pipetting (tekan ke hentian kedua untuk aspirasi, keluarkan ke hentian pertama) meningkatkan akurasi untuk larutan kental atau berbusa.
- Pemilihan tip: gunakan tip yang benar untuk merek pipet. Tip retensi rendah mengurangi kehilangan sampel untuk protein dan deterjen.
Menyiapkan Larutan
Larutan persen massa/volume disiapkan dengan melarutkan massa zat terlarut yang ditimbang dalam pelarut dan membawanya ke volume akhir. Larutan molar disiapkan dengan menghitung mol dari berat molekul, melarutkan, dan menyesuaikan ke volume dalam labu ukur.
Selalu tambahkan zat terlarut ke sebagian volume pelarut, aduk hingga larut, lalu bawa ke tanda akhir. Jangan pernah menambahkan pelarut ke zat terlarut kering dalam labu ukur — volume dapat melampaui tanda.
Pengenceran Serial dan Stok
Larutan stok adalah larutan pekat yang diencerkan ke konsentrasi kerja. Faktor pengenceran adalah rasio volume akhir terhadap volume alikuot:
C₁V₁ = C₂V₂
Pengenceran serial adalah rangkaian pengenceran bertahap di mana setiap langkah mengencerkan dengan faktor konstan (biasanya 10 kali lipat atau 2 kali lipat). Ini adalah cara paling efisien untuk menghasilkan rentang konsentrasi logaritmik untuk kurva standar, uji MIC, atau uji sitotoksisitas.
Saat menyiapkan rangkaian pengenceran, campur secara menyeluruh pada setiap langkah dan ganti tip pipet di antara pemindahan untuk menghindari kontaminasi silang.
