Skrining antibodi (tes antiglobulin tidak langsung, IAT) dan pencocokan silang merupakan prosedur kompatibilitas pra-transfusi yang penting. Tes ini mendeteksi antibodi yang signifikan secara klinis dalam plasma pasien yang dapat menyebabkan reaksi transfusi hemolitik atau penyakit hemolitik pada janin dan bayi baru lahir.
Tes Antiglobulin Tidak Langsung (IAT)
IAT mendeteksi antibodi sel darah merah yang tidak terduga dalam plasma pasien. Plasma pasien diinkubasi dengan skrining reagen sel darah merah dari fenotip antigen yang diketahui (biasanya dua atau tiga set sel yang mencakup antigen yang signifikan secara klinis termasuk D, C, c, E, e, K, k, Fyᵃ, Fyᵇ, Jkᵃ, Jkᵇ, Leᵃ, Leᵇ, M, N, S, s, P1). Setelah inkubasi pada suhu 37°C untuk memungkinkan pengikatan antibodi, sel dicuci untuk menghilangkan imunoglobulin yang tidak terikat. Globulin anti-manusia (AHG, reagen Coombs) ditambahkan, yang menjembatani antibodi IgG yang terikat sel, menyebabkan aglutinasi jika terdapat antibodi. IAT dapat dilakukan dalam metode tabung, kolom gel (mikrokolom), atau fase padat, dengan gel dan fase padat menawarkan standarisasi dan sensitivitas yang lebih baik.
Identifikasi Antibodi
Ketika skrining antibodi positif, identifikasi dilakukan dengan menguji plasma pasien terhadap panel yang terdiri dari 11-16 sel darah merah yang berfenotipe. Pola reaktivitas dianalisis untuk menentukan spesifisitas antibodi. Beberapa antibodi mungkin muncul secara bersamaan, sehingga memerlukan pengecualian yang hati-hati. Karakteristik antibodi umum yang signifikan secara klinis meliputi: anti-K (IgG, respons anamnestik yang kuat), anti-Fyᵃ (IgG, efek dosis), anti-Jkᵃ (IgG, sulit dideteksi, terkait dengan reaksi hemolitik tertunda), anti-M (seringkali IgM, reaktif dingin, biasanya tidak signifikan secara klinis pada suhu 37°C), dan anti-E (IgG, biasa ditemui). Titer antibodi diukur untuk antibodi yang signifikan secara klinis pada kehamilan untuk menilai risiko HDFN.
Pertandingan Silang
Crossmatch adalah pemeriksaan akhir kompatibilitas antara sel darah merah donor dan penerima yang dituju. Ada tiga metode. pencocokan silang putaran langsung mendeteksi ketidakcocokan ABO dengan mencampurkan plasma penerima dengan sel darah merah donor pada suhu kamar dan memeriksa aglutinasi. pencocokan silang antiglobulin (pencocokan silang AHG) adalah yang paling sensitif, menginkubasi plasma penerima dengan sel darah merah donor pada suhu 37°C diikuti dengan AHG, yang mendeteksi antibodi terhadap semua antigen yang signifikan secara klinis. Pencocokan silang komputer (elektronik) digunakan ketika pasien memiliki pemeriksaan antibodi negatif dan tidak memiliki riwayat antibodi yang signifikan secara klinis, dengan mengandalkan verifikasi komputer mengenai kompatibilitas ABO antara unit donor dan jenis penerima.
Antibodi yang Signifikan Secara Klinis
Antibodi diklasifikasikan signifikan secara klinis jika dapat menyebabkan reaksi transfusi hemolitik, HDFN, atau penurunan kelangsungan hidup sel darah merah. Yang paling signifikan adalah melawan ABO (IgM, hemolisis intravaskular), Rh (D, C, c, E, e — IgG, hemolisis ekstravaskular), Kell (K, k — IgG, sangat imunogenik), Duffy (Fyᵃ, Fyᵇ — IgG, terkait dengan reaksi tertunda), Kidd (Jkᵃ, Jkᵇ — IgG, terlibat dalam reaksi hemolitik tertunda, cenderung turun ke tingkat yang tidak terdeteksi), dan MNS (S, s — IgG). Antibodi yang tidak signifikan secara klinis (biasanya IgM, reaktif dingin, tidak reaktif pada suhu 37°C) meliputi anti-Leᵃ, anti-Leᵇ, anti-I, anti-P1, dan sebagian besar anti-M. Pembedaannya memerlukan pengujian amplitudo termal dan pengetikan antigen.
Pertimbangan Khusus
Pasien dengan skrining antibodi positif memerlukan unit RBC antigen-negatif untuk transfusi. Bank darah harus memelihara inventarisasi unit donor yang berfenotip untuk pasien yang diimunisasi aloimunisasi. Pasien dengan anemia hemolitik autoimun hangat (AIHA) menimbulkan tantangan khusus karena autoantibodi menyebabkan reaktivitas pan pada IAT dan pencocokan silang. Teknik untuk mengatasi gangguan autoantibodi meliputi pengujian kontrol otomatis, adsorpsi dingin, dan allloadsorpsi untuk mendeteksi aloantibodi yang mendasarinya. Pasien dengan riwayat transfusi baru-baru ini atau hamil dalam waktu 3 bulan mungkin memiliki pemeriksaan antibodi negatif namun tetap berisiko mengalami reaksi hemolitik tertunda karena tingkat aloantibodi yang rendah di bawah ambang batas deteksi.
Kontrol Kualitas dan Dokumentasi
Semua prosedur skrining antibodi dan pencocokan silang memerlukan kontrol kualitas harian: verifikasi integritas reagen (AHG, sel skrining, media penambah), kontrol positif dan negatif, dan dokumentasi semua hasil. Catatan riwayat pasien harus diperiksa antibodi sebelumnya. Investigasi reaksi transfusi memerlukan skrining antibodi pasca transfusi, tes antiglobulin langsung, dan pencocokan silang berulang dengan unit yang ditransfusikan.
