Kultur sel adalah teknik fundamental untuk mempelajari fisiologi seluler, memproduksi protein rekombinan, menguji kandidat obat, dan memproduksi terapi sel. Keberhasilan tergantung pada teknik aseptik, media yang sesuai, dan kondisi lingkungan yang terkendali.

Biosafety dan Teknik Aseptik

Semua pekerjaan kultur sel dilakukan di lemari keamanan hayati Kelas II (BSC) menggunakan teknik steril. BSC melindungi pengguna dan kultur dengan menyaring udara melalui filter HEPA dan menciptakan aliran udara laminar ke bawah.

Praktik aseptik utama:

• Semprot semua barang dengan etanol 70% sebelum menempatkannya di BSC.
• Jangan memblokir kisi-kisi udara di depan atau belakang kabinet.
• Bekerja dari bersih ke kotor — atur reagen di satu sisi dan limbah di sisi lain.
• Jangan pernah menyentuh bagian dalam tutup atau tepi botol steril.
• Ganti sarung tangan setelah menangani barang non-steril.

Media Pertumbuhan

Sebagian besar sel mamalia dikultur dalam media kompleks yang menyediakan nutrisi, faktor pertumbuhan, dan sistem buffer pH. Formulasi umum:

• DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium): glukosa tinggi (4,5 g/L) atau glukosa rendah (1 g/L). Digunakan untuk HeLa, HEK 293, fibroblas.
• RPMI-1640: dikembangkan untuk sel suspensi dan limfosit. Umumnya digunakan untuk sel hematopoietik dan hibridoma.
• F-12 / Ham’s F-12: media kaya untuk kloning bebas serum dan sel CHO.
• FBS (fetal bovine serum): ditambahkan pada 5–20% (biasanya 10%) untuk menyediakan faktor pertumbuhan, hormon, dan faktor adhesi. Variabilitas lot dapat mempengaruhi reprodusibilitas — uji dan cadangkan lot yang konsisten.

Kontrol Lingkungan

Sel mamalia diinkubasi pada 37 °C dalam atmosfer lembab dengan 5% CO₂ di udara. CO₂ larut dalam medium membentuk asam karbonat, yang dengan sistem buffer bikarbonat mempertahankan pH pada ~7,4. Baki pelembab inkubator harus diisi dengan air steril dan dibersihkan secara teratur untuk mencegah pertumbuhan jamur dan bakteri.

Jenis Sel

• Sel adheren: menempel pada wadah kultur (misalnya, HeLa, HEK 293, MDCK, fibroblas primer). Memerlukan trypsinisasi untuk pasase.
• Sel suspensi: tumbuh mengapung dalam medium (misalnya, Jurkat, HL-60, banyak hibridoma). Dipasase dengan mengencerkan dengan medium segar.
• Sel primer: diisolasi langsung dari jaringan. Memiliki masa hidup terbatas (batas Hayflick). Lebih relevan secara fisiologis tetapi lebih sulit dikultur.
• Garis sel abadi: berasal dari tumor atau ditransformasi in vitro. Dapat dipasase tanpa batas tetapi mungkin menyimpang secara genetik dari jaringan asli.

Pasase (Subkultur)

Sel adheren dipasase ketika mencapai konfluensi 70–90%. Protokol standar: buang medium, cuci dengan PBS (bebas Ca²⁺/Mg²⁺), tambahkan trypsin-EDTA, inkubasi pada 37 °C selama 2–5 menit hingga sel terlepas, tambahkan medium segar untuk menetralisir trypsin, hitung, dan tanam kembali pada kepadatan yang sesuai.

Catat nomor pasase setiap kali. Sel harus digunakan dalam rentang pasase yang ditentukan (misalnya, pasase 3–20 untuk sebagian besar garis sel abadi) untuk meminimalkan penyimpangan fenotipik.