Migrasi sel sangat penting untuk perkembangan embrio, penyembuhan luka, dan respons imun. Invasi memperluas migrasi dengan degradasi aktif matriks ekstraseluler (ECM). Uji ini sangat penting dalam penelitian kanker, studi angiogenesis, dan skrining obat.

Uji Scratch (Penyembuhan Luka)

Uji scratch adalah uji migrasi yang paling sederhana dan paling hemat biaya. Monolayer konfluen digores dengan ujung tip pipet untuk membuat zona bebas sel, dan laju migrasi sel ke dalam celah diukur dari waktu ke waktu.

Protokol:

1. Tumbuhkan sel hingga konfluensi 100% dalam plat 12 atau 24 sumur.
2. Starvasi serum semalaman untuk menekan proliferasi.
3. Gores monolayer dengan ujung tip pipet 200 µL atau alat pembuat luka khusus.
4. Cuci dengan PBS untuk menghilangkan sel yang terlepas.
5. Tambahkan medium dengan 0,5–2% serum (untuk meminimalkan proliferasi).
6. Gambarkan goresan pada interval waktu (0, 6, 12, 24 jam) menggunakan mikroskop kontras fase.
7. Ukur area luka menggunakan ImageJ atau alat analisis otomatis.

Data dinyatakan sebagai % penutupan luka atau laju penutupan. Uji ini sederhana tetapi terbatas oleh variabilitas goresan manual dan efek membingungkan dari proliferasi di tepi luka.

Uji Transwell (Boyden Chamber)

Uji Transwell menggunakan sistem dua ruang yang dipisahkan oleh membran berpori (biasanya pori 8 µm untuk sebagian besar tipe sel, 3 µm untuk sel kecil seperti limfosit). Sel ditempatkan di ruang atas, dan chemoattractant (misalnya, FBS 10%, kemokin spesifik) ditempatkan di ruang bawah. Sel yang bermigrasi melalui pori difiksasi, diwarnai (crystal violet, DAPI), dan dihitung.

Untuk uji invasi, sisi atas membran dilapisi dengan lapisan tipis Matrigel, ekstrak membran basal. Sel harus mendegradasi penghalang ECM sebelum bermigrasi melalui pori, meniru invasi fisiologis lebih dekat daripada migrasi saja.

Opsi kuantifikasi:

• Penghitungan manual sel yang diwarnai di sisi bawah membran (5–10 bidang per sumur).
• Melarutkan pewarna dan mengukur absorbansi (OD 560–590 nm).
• Memberi label awal sel dengan Calcein AM dan mengukur fluoresensi sel yang bermigrasi.

Analisis Sel Waktu Nyata

Instrumen bebas label seperti xCELLigence menggunakan mikroelektroda di dasar plat khusus untuk mengukur impedansi listrik. Saat sel bermigrasi dari sumur atas melalui membran, mereka menempel ke permukaan mikroelektroda di sisi bawah, meningkatkan sinyal impedansi. Ini menyediakan data migrasi waktu nyata secara berkelanjutan tanpa pewarnaan atau fiksasi akhir.

Pertimbangan Utama

• Gradien serum: gradien konsentrasi melintasi membran menyediakan migrasi terarah. Tanpa gradien, pergerakan acak (kemokinetik) diukur.
• Lapisan matriks: untuk invasi, ukuran pori membran, komposisi matriks (Matrigel, kolagen I, fibronektin), dan ketebalan lapisan semuanya mempengaruhi hasil.
• Kepadatan sel: terlalu sedikit sel menghasilkan hitungan rendah; terlalu banyak menyebabkan agregasi dan pori tersumbat. Optimalkan kepadatan untuk setiap tipe sel.
• Kursus waktu: migrasi melalui pori 8 µm biasanya memakan waktu 6–24 jam tergantung pada tipe sel.