Ikhtisar

Metabolomik yang ditargetkan adalah pendekatan berbasis hipotesis yang mengukur panel metabolit yang telah ditentukan sebelumnya dengan akurasi, spesifisitas, dan sensitivitas tinggi. Tidak seperti profil metabolik yang tidak ditargetkan, yang bertujuan untuk cakupan yang komprehensif, metode yang ditargetkan berfokus pada metabolit yang diketahui – sering kali berasal dari jalur atau kelas tertentu – dan menggunakan standar kimia asli untuk mencapai kuantifikasi absolut. Pendekatan ini biasanya diterapkan pada spektrometer massa triple quadrupole menggunakan pemantauan reaksi ganda (MRM) atau pada instrumen resolusi tinggi dengan pemantauan reaksi paralel (PRM). Metabolomik yang ditargetkan adalah metode pilihan ketika metabolit yang diinginkan telah dikarakterisasi dengan baik dan ketepatan kuantitatif adalah yang terpenting.

Metode

Standar internal: analog berlabel isotop yang idealnya stabil dari setiap metabolit target, ditambahkan ke setiap sampel pada konsentrasi yang diketahui untuk mengoreksi efek matriks, kehilangan ekstraksi, dan penyimpangan instrumen. Kurva standar yang disiapkan dalam matriks biologis yang sama menetapkan rentang linier dan batas kuantifikasi untuk setiap metabolit. Transisi MRM dioptimalkan dengan memasukkan langsung setiap standar untuk memilih pasangan prekursor-ke-fragmen yang paling sensitif dan spesifik. Persiapan sampel disesuaikan dengan kelas metabolit: pengendapan protein untuk metabolit polar, ekstraksi cair-cair untuk lipid, atau ekstraksi fase padat untuk pengayaan yang ditargetkan. Data diproses menggunakan perangkat lunak yang mengintegrasikan area puncak, menerapkan kurva kalibrasi, dan melakukan penilaian kendali mutu dengan sampel referensi yang dikumpulkan.

Aplikasi

Metabolomik yang ditargetkan digunakan untuk memverifikasi biomarker yang ditemukan dalam penelitian yang tidak ditargetkan, untuk memantau fluks melalui jalur metabolisme tertentu seperti glikolisis dan siklus asam sitrat, dan untuk membuat profil perubahan metabolik dalam kohort klinis. Ini adalah standar terbaik untuk pengujian metabolomik klinis, yang sering kali dipadukan dengan pemisahan HPLC dan deteksi spektrometri massa untuk memastikan kuantifikasi yang kuat dan menghasilkan hasil yang tinggi.