革兰染色根据细胞壁结构区分细菌,但许多细菌特征需要专门的染色方法才能进行显微镜观察。
内孢子染色
细菌内孢子是休眠的、高度抗性的结构,普通染色或革兰染色不着色。Schaeffer–Fulton 方法使用孔雀石绿,通过热驱动进入孢子,并用藏红作为复染剂。
- 用 5%(w/v)孔雀石绿覆盖涂片并蒸汽加热 5 分钟。
- 冷却并用水冲洗。
- 用 0.5% 藏红复染 30 秒。
- 冲洗、吸干并检查。
孢子呈绿色,营养细胞呈粉红/红色。孢子的位置是关键的鉴定特征。
荚膜染色
荚膜是围绕某些细菌的多糖或多肽层,保护它们免受吞噬和干燥。荚膜水溶性,热固定易被破坏。
Anthony 法:涂片风干,用 1% 结晶紫染色 2 分钟,然后用 20% 硫酸铜洗涤。硫酸铜充当脱色剂和媒染剂。荚膜在深紫色细胞周围呈现淡紫色晕圈。
印度墨汁负染色:将细菌悬液与印度墨汁混合,薄涂并风干。墨汁颗粒无法穿透荚膜,在深色背景中细胞周围留下清晰晕圈。
鞭毛染色
细菌鞭毛厚度为 10–20 nm,低于光学显微镜的分辨率。鞭毛染色使用媒染剂包裹和增厚鞭毛,然后进行银染或副品红染色。
- 使用在固体培养基上生长的幼龄培养物。
- 制备薄的风干涂片——不要热固定。
- 施加媒染剂并孵育。
- 鞭毛呈现为从细胞体延伸的细波纹状丝线。
鞭毛排列是重要的分类学特征。
抗酸染色
分枝杆菌具有富含分枝菌酸的蜡质细胞壁,能抵抗标准革兰染色。Ziehl–Neelsen 方法使用热将石炭酸品红驱动通过蜡质屏障:
- 用石炭酸品红覆盖涂片并蒸汽加热 5 分钟。
- 用 3% HCl 的 95% 乙醇脱色——非抗酸细菌失去染色。
- 用亚甲蓝复染 1 分钟。
抗酸细菌在蓝色背景上呈现亮红色。Kinyoun 方法在石炭酸品红中使用更高浓度的苯酚和去垢剂,无需加热。金胺-罗丹明染色使用荧光染料提高筛查结核病的灵敏度。