明场显微镜是组织病理学的主力,每一张染色的载玻片都在透射白光下进行检查。偏光显微镜增加了检测双折射物质(例如淀粉样蛋白、胶原蛋白和晶体)的能力。
明场显微镜
明场显微镜用白光从下方照亮标本;染色的组织吸收特定的波长,通过不同的光吸收产生对比度。关键组件包括光源(卤素或 LED)、聚光镜(将光聚焦在样本上)、物镜(4x、10x、20x、40x、60x、100x)和目镜(10x)。总放大倍数为物镜×目镜。
科勒照明是标准对准方法,可确保均匀、无眩光的照明。步骤包括聚焦聚光镜、居中视场光阑以及将孔径光阑调整至物镜数值孔径的 70-80%。正确的科勒对准可以最大限度地提高分辨率和对比度,同时最大限度地减少眼睛疲劳。
目标选择取决于所检查的结构。扫描物镜 (4x) 调查组织结构。低倍物镜 (10x) 显示一般组织学并识别病变。高干燥物镜(20 倍、40 倍)可检查细胞细节。油浸物镜(60x、100x)可解析亚细胞结构和微生物。浸油与玻璃的折射率相匹配,减少光散射。
对比度增强技术
相差将折射率差异转化为对比度差异,对于检查活的、未染色的细胞很有用,但在常规组织病理学中很少需要。
暗视野显微镜使用特殊的聚光镜来引导斜光,使未染色的物体在黑暗背景下显得明亮。它对于检测组织切片中的螺旋体和细细菌非常敏感。
微分干涉对比 (DIC) 使用偏振光和棱镜创建三维浮雕图像,可用于检查未染色的结构和计数有丝分裂图。
偏光显微镜
偏振显微镜使用两个偏振滤光片:聚光器下方的偏振器和物镜上方的分析器。当滤光片交叉(90°)时,没有光到达目镜,除非样本包含旋转偏振平面的双折射材料。
淀粉样蛋白用刚果红染色,在交叉偏光镜下显示出苹果绿双折射,淀粉样变性的诊断金标准。双折射是由淀粉样原纤维的β折叠片结构产生的。
胶原蛋白由于其高度有序的纤维结构而具有天然双折射性。偏振可增强结缔组织染色中胶原蛋白的可见度,并有助于对纤维化进行分级。
晶体:尿酸(痛风)、焦磷酸钙(假痛风)、胱氨酸和二氧化硅,具有明亮的双折射。偏光显微镜对于识别滑液和组织切片中的晶体类型至关重要。
当用偏振观察时,肺组织中的石棉体显示出特征性的双折射芯。
病理学家的实际考虑
多头教学显微镜允许多个观察者同时观察,以进行共识诊断和质量保证审查。 人体工程学很重要,可调节的椅子高度、倾斜的显微镜头和扶手可防止长时间观察过程中的重复性劳损。 清洁: 只能使用镜头纸和经批准的溶液清洁镜片;每次使用后必须清除物镜上的浸油。 校准: 目镜千分尺测量物体尺寸;台千分尺校准测量系统。 安装在显微镜上的数码相机可捕获图像以用于报告、教学和数字病理学 档案。定期显微镜维修(每年专业清洁和校准)可保持光学性能。