了解活细胞的数量及其分裂速度对于可重复的细胞培养和药理学实验至关重要。

血球计数板计数

血球计数板是一种专门设计的显微镜载玻片，带有两个刻有计数池，每个计数池包含一个已知尺寸的网格。网格由九个 1 × 1 mm 的方格组成，每个方格再细分为 16 个小方格。深度为 0.1 mm，因此每个 1 mm² 方格的体积为 0.1 µL。

1. 充分混匀细胞悬液以确保为单细胞。
2. 将 10 µL 细胞悬液与 10 µL 0.4% 台盼蓝（用于活力检测）混合。
3. 将 10 µL 混合物加入血球计数板计数池。
4. 计数四个角落的 1 mm² 方格中的细胞（为达到统计显著性，总计至少 100 个细胞）。
5. 计算：细胞数/mL =（每格平均计数）× 稀释因子 × 10⁴。

台盼蓝排斥法

台盼蓝不能进入膜完整的活细胞，但能进入死细胞，将其染成蓝色。活力 =（活细胞数 / 总细胞数）× 100%。大多数实验可接受的活力为 >90%。

自动细胞计数器

自动计数器（Countess、Vi-CELL、Cellometer）使用台盼蓝和数字图像分析，可在数秒内计数数百个细胞。它们减少了操作者之间的差异，并提供细胞大小分布数据。大多数还能计算活力并标记细胞团块。定期用人工血球计数板计数校准自动计数器。

活力与细胞毒性检测

除了台盼蓝，还有几种基于板的检测方法可在多孔板中评估活力和细胞毒性：

• MTT/MTS 检测：活细胞中的线粒体脱氢酶将四唑盐还原为有色甲臜（吸光度 490–570 nm）。信号与代谢活性细胞的数量成正比。
• 刃天青：活细胞将刃天青还原为荧光的试卤灵。无毒——可随时间对同一细胞进行测量。
• LDH 释放检测：从受损细胞释放到培养基中的乳酸脱氢酶通过酶学方法测量（吸光度 490 nm）。直接测量细胞毒性。
• ATP 检测（CellTiter-Glo）：基于荧光素酶的细胞 ATP 测量。极其灵敏，在宽动态范围内呈线性。

增殖检测

• 生长曲线：每天计数细胞，持续 5–7 天，绘制细胞数对数与时间的关系图。倍增时间根据指数期计算。
• BrdU/EdU 掺入：在 S 期掺入 DNA 的核苷类似物通过抗体染色（BrdU）或点击化学（EdU）检测。通过流式细胞术、荧光显微镜或 ELISA 测量。
• SRB 检测（磺酰罗丹明 B）：染色细胞蛋白。固定后的细胞用 SRB 染色，结合染料被溶解后在 510 nm 处测量。线性度和稳定性极佳。