磁激活细胞分选是一种快速、可扩展的基于表面标志物表达纯化细胞的方法。广泛用于 T 细胞分离、干细胞富集和下游分析前的样品制备。

原理

细胞用偶联了针对特定表面抗原的抗体的超顺磁性纳米颗粒标记。标记的悬液通过置于强磁场中填充有铁磁钢纤维的柱子。标记的细胞被保留在柱中，而未标记的细胞通过。将柱子从磁铁中取出后，保留的细胞被洗脱为阳性组分。

磁珠

• MicroBeads：50 nm 超顺磁性颗粒。它们不激活细胞或改变功能，在培养或注射期间可保留在细胞上。珠子-抗体复合物通常不交联，允许珠子随时间从细胞表面解离。
• EasySep：200 nm 葡聚糖包被的磁性颗粒，与细胞悬液孵育，然后在置于磁铁中的试管中分离而无需柱子。

阳性与阴性选择

阳性选择：目标细胞直接用针对感兴趣标志物的磁珠标记。阳性组分含有目标细胞，带有结合的珠子。

阴性选择（去除）：不需要的细胞用针对多个标志物的抗体混合物标记，目标细胞在流穿液中保持未经触动的状态。阴性选择避免任何抗体结合到目标细胞，保持其天然状态。

操作

1. 制备单细胞悬液。通过 30–70 µm 过滤器去除团块。
2. 计数细胞并在 300 × g 下离心 10 分钟。
3. 在脱气缓冲液中重悬。
4. 在 4 °C 下与磁珠孵育 15–30 分钟。
5. 洗涤以去除过量磁珠。
6. 将细胞悬液施加到磁柱上。
7. 在磁场中用缓冲液洗涤柱子 3 次。
8. 将柱子从磁铁中取出，通过将缓冲液推过柱子洗脱保留的细胞。

纯度与回收率

纯度取决于抗体的特异性、洗涤的严格性和流速。阳性选择的典型纯度为 90–99%。回收率为 50–90%。在新鲜柱上多次通过可提高纯度，但会降低回收率。

与 FACS 的比较

MACS 更快、更温和、可扩展，无需专门的操作者或仪器。FACS 提供更高的纯度，可同时基于多个参数进行分选，并可以高精度分离稀有亚群。MACS 和 FACS 常结合使用：MACS 用于批量富集，FACS 用于精细分选。