Strep标签纯化使用短肽标签（Strep-tag II）特异性结合工程链霉亲和素（Strep-Tactin），在生理条件下无需金属离子或还原剂即可实现温和的一步蛋白质纯化。

原理

Strep-tag II是一个八氨基酸肽序列（WSHPQFEK），模拟生物素与链霉亲和素的相互作用。它结合Strep-Tactin，一种工程改造的链霉亲和素变体，具有修饰的结合口袋，以高亲和力（K_d ≈ 1 µM）容纳该肽。结合是可逆的：洗脱使用2.5 mM脱硫生物素，一种生物素类似物，竞争性置换标签。脱硫生物素比生物素结合更弱，在缓冲液交换过程中被去除，允许树脂再生。或者，10 mM生物素可用于完全洗脱，但会阻止树脂重复使用。整个过程与生理缓冲液兼容，保留天然蛋白质结构和活性。

Twin-Strep标签

Twin-Strep-tag（两个串联的Strep-tag II序列，由短接头分隔）显著提高结合亲和力（K_d ≈ 10⁻¹¹ M），能够捕获极低表达水平的蛋白质并从稀释样品中纯化。它还允许定量捕获蛋白质复合物。Twin-Strep-tag推荐用于困难靶标以及从内源表达水平进行的蛋白质相互作用伴侣的亲和捕获。

树脂与形式

Strep-Tactin琼脂糖（IBA Lifesciences，现为Cube Biotech的一部分）提供约50 nmol Strep-tag II肽每mL的结合容量（约1.3 mg的26 kDa蛋白）。Strep-Tactin Superflow高性能树脂与FPLC系统兼容，流速可达5 mL/min。Strep-Tactin磁珠可用于小规模纯化和下拉实验。Strep-TactinXT是改进版本，对常规Strep-tag II具有更高亲和力，在大多数应用中消除了对更大Twin-Strep标签的需求。

缓冲液

上样/洗涤缓冲液：100 mM Tris-HCl pH 8.0，150 mM NaCl，1 mM EDTA。洗脱缓冲液：上样缓冲液加2.5 mM脱硫生物素。再生缓冲液：上样缓冲液中的1 mM HABA（羟基偶氮苯-苯甲酸）或10 mM生物素，用于去除残留结合蛋白或脱硫生物素。缓冲液与还原剂（< 2 mM DTT或TCEP）和温和去垢剂（0.1% Triton X-100，0.05% NP-40）兼容。在上样步骤中应避免强还原剂（> 10 mM DTT）和含生物素溶液（> 2 µM），因为它们会干扰结合。

方案

用上样缓冲液平衡Strep-Tactin树脂。上样澄清裂解液（分批孵育30分钟，4 °C，或柱以0.5–1 mL/min）。用10–20倍柱体积上样缓冲液洗涤。用6–10倍柱体积洗脱缓冲液（脱硫生物素）洗脱。如果使用生物素，用5倍柱体积洗脱，并注意树脂不能重复使用。用HABA或生物素缓冲液再生，然后平衡以重复使用最多五次。收集级分并通过SDS-PAGE分析。

优势

Strep标签小（8个氨基酸，1 kDa），很少影响蛋白质功能，使大多数应用无需去除标签。用脱硫生物素在生理条件下洗脱保留了酶活性、复合物完整性和抗体结合。该系统与His标签兼容用于双标签纯化。无金属离子消除了金属催化的氧化风险。应用包括重组蛋白纯化、蛋白复合物分离和相互作用伴侣的下拉。