超临界流体色谱 (SFC) 使用超临界流体（高于其临界温度和临界压力的物质）作为流动相。二氧化碳 (CO2) 是使用最广泛的流体（T_c = 31.1°C，P_c = 73.8 bar），因为它无毒、不易燃、具有化学惰性且易于获取。作为一种超临界流体，CO2 具有类似液体的密度（提供溶剂化能力）和类似气体的粘度和扩散性（实现高流速、低背压和快速传质），从而实现比 HPLC 更快、更高效的分离。

SFC 仪器包括能够输送液态二氧化碳（通常是冷却的）的泵、用于添加有机共溶剂的改性泵、进样器、柱温箱、用于维持系统压力的背压调节器 (BPR) 和检测器。 BPR 必须使整个色谱柱的流动相保持超临界状态，然后在检测前减压。 **添加甲醇、乙醇或乙腈（通常为 1-40%）等改性剂来提高 CO2 的溶剂强度，而 CO2 本身是非极性的，不足以洗脱极性分析物。添加水或酸性/碱性添加剂可以进一步扩大极性范围。

SFC 的一个主要优势是它与多种探测器的兼容性。 紫外/可见光检测是最常见的，但 SFC 自然地与质谱 (MS) 结合，因为 CO2 流动相具有挥发性且易于去除，与 HPLC-MS 相比，可以减少背景。 火焰离子化检测 (FID) 在不使用有机改性剂的情况下使用 CO2（与 HPLC 不同）时是可能的，这使得 SFC-FID 成为定量非紫外线吸收化合物（例如脂质和碳氢化合物）的强大工具。 手性分离在 SFC 中特别成功，因为低粘度流动相允许高效使用长手性色谱柱，并且 CO2 的溶剂化特性通常可增强手性识别。在毛细管电泳中，使用环糊精等手性选择剂的胶束电动色谱 (MEKC) 提供了一种手性分离的替代方法，特别是对于水溶性和带电分析物。

与 HPLC 相比，SFC 具有更短的分析时间、更低的溶剂消耗（降低成本和环境影响）以及更快的色谱柱平衡。与 GC 相比，SFC 可以分析热不稳定和非挥发性化合物，无需衍生化。 SFC 广泛应用于制药行业的手性分离、纯度分析和快速色谱纯化。在天然产品领域，SFC 分离脂质、萜烯和精油。该技术已成为制备型手性分离的首选方法，其中从 CO2 中轻松去除溶剂大大简化了产品分离。